| 摘要 | 第7-9页 |
| Summary | 第9-10页 |
| 缩略词表 | 第11-13页 |
| Ⅰ 文献综述 | 第13-22页 |
| 1 罂粟的生物学特性 | 第13-14页 |
| 2 罂粟中的生物碱类型 | 第14页 |
| 3 罂粟中生物碱合成代谢途径的解析 | 第14-15页 |
| 4 基因沉默技术的研究进展 | 第15-22页 |
| 4.1 RNAi技术 | 第15-16页 |
| 4.2 RNAi的作用原理 | 第16-17页 |
| 4.3 RNAi的特征 | 第17页 |
| 4.4 RNAi在植物遗传改良中的应用 | 第17-19页 |
| 4.4.1 RNAi在改良作物形态结构中的应用 | 第17-18页 |
| 4.4.2 RNAi在作物品质改良中的应用 | 第18-19页 |
| 4.4.3 RNAi在功能基因组学中的应用 | 第19页 |
| 4.5 RNAi的发展前景 | 第19-21页 |
| 4.5.1 RNAi在医学上的发展前景 | 第19-20页 |
| 4.5.2 RNAi技术的前景展望 | 第20页 |
| 4.5.3 罂粟育种研究现状 | 第20-21页 |
| 4.6 siRNA设计方法 | 第21-22页 |
| Ⅱ 本研究的目的和意义 | 第22-23页 |
| Ⅲ 研究技术路线 | 第23-24页 |
| Ⅳ 材料与方法 | 第24-44页 |
| 1 实验材料 | 第24-25页 |
| 1.1 植物材料 | 第24页 |
| 1.2 菌种与载体 | 第24页 |
| 1.3 主要试剂与工具酶 | 第24页 |
| 1.4 仪器设备 | 第24页 |
| 1.5 培养基 | 第24-25页 |
| 1.5.1 植物组织培养基 | 第24页 |
| 1.5.2 细菌培养基 | 第24-25页 |
| 1.5.3 遗传转化培养基 | 第25页 |
| 1.6 IPTG和X-Gal | 第25页 |
| 2 实验方法 | 第25-44页 |
| 2.1 罂粟幼苗的培养 | 第25页 |
| 2.2 罂粟总RNA提取 | 第25-26页 |
| 2.2.1 罂粟叶片总RNA提取 | 第25-26页 |
| 2.2.2 RNA纯度及完整性检测 | 第26页 |
| 2.3 罂粟CODM、T6ODM基因克隆 | 第26-32页 |
| 2.3.1 RT-PCR反应 | 第26-29页 |
| 2.3.1.1 第一链cDNA合成 | 第26-27页 |
| 2.3.1.2 PCR引物的设计与合成 | 第27页 |
| 2.3.1.3 RT-PCR扩增（第二链cDNA合成） | 第27-29页 |
| 2.3.2 PCR 产物回收 | 第29页 |
| 2.3.3 连接反应 | 第29-30页 |
| 2.3.4 连接产物的转化 | 第30页 |
| 2.3.4.1 大肠杆菌E.coli DH5α 感受态细胞的制备 | 第30页 |
| 2.3.4.2 连接产物的转化及蓝白斑筛选 | 第30页 |
| 2.3.5 质粒DNA的提取 | 第30-31页 |
| 2.3.6 重组子的PCR鉴定及酶切鉴定 | 第31-32页 |
| 2.4 靶标片段的克隆 | 第32-34页 |
| 2.4.1 靶标片段的选择及引物设计 | 第32-33页 |
| 2.4.2 靶标片段的扩增 | 第33-34页 |
| 2.5 靶标片段的融合以及正反向插入片段的合成 | 第34-36页 |
| 2.5.1 靶标片段的融合 | 第34页 |
| 2.5.2 正向插入片段的合成 | 第34-35页 |
| 2.5.3 反向插入片段的合成 | 第35-36页 |
| 2.6 RNAi中间载体的构建 | 第36-38页 |
| 2.6.1 正向片段插入载体pHANNIBAL | 第36-37页 |
| 2.6.2 反向片段插入载体pHACTF | 第37-38页 |
| 2.7 RNAi表达载体的构建 | 第38页 |
| 2.8 RNAi表达载体转化农杆菌LBA4404 | 第38-41页 |
| 2.8.1 农杆菌感受态细胞的制备 | 第38-40页 |
| 2.8.2 RNAi表达载体转化农杆菌 | 第40页 |
| 2.8.3 农杆菌工程菌株的鉴定 | 第40-41页 |
| 2.9 农杆菌介导的烟草转化 | 第41-42页 |
| 2.9.1 转化过程 | 第41页 |
| 2.9.2 转化烟草植株的DNA提取及鉴定 | 第41-42页 |
| 2.10 罂粟的再生体系研究及遗传转化 | 第42-44页 |
| 2.10.1 罂粟无菌苗的培养 | 第42-43页 |
| 2.10.2 农杆菌介导罂粟转化 | 第43-44页 |
| Ⅴ 结果与分析 | 第44-57页 |
| 1 罂粟盆栽及总RNA的提取 | 第44页 |
| 2 吗啡合成途径关键酶基因CODM、T6ODM的克隆 | 第44-50页 |
| 3 靶标基因敏感片段的选择和克隆 | 第50页 |
| 4 靶标基因敏感片段的融合与鉴定 | 第50-52页 |
| 5 ihpRNAi中间载体的构建鉴定 | 第52-53页 |
| 5.1 正向片段插入 | 第52页 |
| 5.2 反向片段插入 | 第52-53页 |
| 5.3 ihpRNAi载体的获得 | 第53页 |
| 6 靶标基因ihpRNAi载体导入农杆菌 | 第53-54页 |
| 7 靶标基因ihpRNAi载体对烟草的转化及验证 | 第54-56页 |
| 8 罂粟的遗传转化 | 第56-57页 |
| Ⅵ 讨论 | 第57-59页 |
| Ⅶ 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-67页 |
| 附表 | 第67-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 作者简介 | 第70-71页 |
| 导师简介 | 第71-72页 |
