| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-55页 |
| 第一节 RNA干扰介导的基因沉默及其在医学上的应用 | 第13-41页 |
| 一、RNA干扰现象的发现 | 第13-15页 |
| 二、RNA干扰介导的基因沉默的作用机制 | 第15-20页 |
| 1. siRNA与miRNA | 第15-16页 |
| 2. RNA干扰介导的基因沉默机制 | 第16-20页 |
| ·转录后水平基因沉默 | 第17-18页 |
| ·翻译水平基因沉默 | 第18-19页 |
| ·转录水平基因沉默 | 第19-20页 |
| ·基因沉默的放大效应 | 第20页 |
| 三、RNA干扰介导的基因沉默的作用特点 | 第20-21页 |
| 四、RNA干扰介导的基因沉默在生物体内的功能 | 第21-37页 |
| 1. 基因沉默是一种天然而古老的抗病毒机制 | 第21-28页 |
| ·多种生物体内基因沉默的抗病毒功能 | 第21-23页 |
| ·果蝇 | 第21页 |
| ·人类 | 第21-22页 |
| ·植物 | 第22-23页 |
| ·真菌 | 第23页 |
| ·基因沉默的抗病毒作用的系统性传播 | 第23-24页 |
| ·RNAi和干扰素途径的相互关系 | 第24-25页 |
| ·病毒对RNAi的抑制作用 | 第25-28页 |
| ·植物病毒的抗沉默作用 | 第25-27页 |
| ·动物病毒的抗沉默作用 | 第27-28页 |
| 2. 基因沉默参与基因调控 | 第28-37页 |
| ·miRNA参与基因调控 | 第29-35页 |
| ·参与基因调控miRNA的种类 | 第29-30页 |
| ·调节机制与特点 | 第30-32页 |
| ·功能 | 第32-35页 |
| ·对生长发育的调控 | 第32-33页 |
| ·对细胞分化的控制 | 第33页 |
| ·对肿瘤基因的表达调控 | 第33-35页 |
| ·siRNA与DNA甲基化、染色质浓缩转座子沉默 | 第35-37页 |
| 五、RNA干扰技术目前的应用 | 第37-41页 |
| 1. 研究基因功能的新工具 | 第37页 |
| 2. 研究信号传导通路的新途径 | 第37-38页 |
| 3. 开展基因治疗的新策略 | 第38-39页 |
| ·RNA干扰技术在抗病毒研究中的应用 | 第38-39页 |
| ·基因沉默技术对人类病毒的治疗 | 第38页 |
| ·利用RNA沉默产生抗病毒植物 | 第38-39页 |
| ·RNA干扰技术在抗肿瘤研究中的应用 | 第39页 |
| 4 RNAi存在的缺陷 | 第39-41页 |
| ·RNAi治疗的副效应 | 第39-40页 |
| ·脱靶效应及应对新的突变 | 第40-41页 |
| 第二节 Dicer家族及其研究进展 | 第41-46页 |
| 一、Dicer酶的一级结构 | 第41-42页 |
| 二、Dicer的种类和功能 | 第42-44页 |
| 1. 拟南芥中DCL的种类和功能 | 第42-43页 |
| 2. 果蝇中Dicer的种类和功能 | 第43-44页 |
| 3. 哺乳动物和线虫Dicer的种类和功能 | 第44页 |
| 三、病毒对Dicer功能的抵抗和抑制 | 第44-46页 |
| 第三节 对虾抗病毒研究进展及本课题的研究意义 | 第46-55页 |
| 一、对虾抗病毒机制研究进展 | 第46-53页 |
| 1. 病毒性疾病是当前虾病研究领域的焦点 | 第46-47页 |
| 2. 对虾抗病毒机制研究进展 | 第47-53页 |
| ·病毒对宿主细胞的吸附 | 第47-48页 |
| ·甲壳类中与抗病毒免疫有关的基因和蛋白 | 第48-51页 |
| ·血蓝蛋白 | 第48-49页 |
| ·抗脂多糖因子 | 第49页 |
| ·凝集素和PmAV | 第49页 |
| ·转录因子 | 第49-51页 |
| ·信号传导及转录激活因子STAT | 第49-50页 |
| ·Syntenin与eIF5A | 第50-51页 |
| ·Rab和Ran | 第51页 |
| ·其它上调表达的基因 | 第51页 |
| ·Apoptosis | 第51-53页 |
| 二、RNAi在对虾抗病毒中的作用 | 第53-54页 |
| 1. RNAi技术已成为有效的抗病毒技术 | 第53-54页 |
| 2. 对虾体内基因沉默相关途径的基因的克隆与表达 | 第54页 |
| 三、基因沉默在对虾抗病毒研究中的进展及本课题的研究意义 | 第54-55页 |
| 第二章 凡纳滨对虾Dicer-1基因CDNA克隆和表达 | 第55-98页 |
| 前言 | 第55-57页 |
| 第一节 凡纳滨对虾Dicer-1基因cDNA克隆和表达 | 第57-87页 |
| 一.材料方法 | 第57-65页 |
| 1. 材料 | 第57-60页 |
| ·凡纳滨对虾 | 第57-59页 |
| ·组织表达样品 | 第57页 |
| ·TSV感染实验样品 | 第57-59页 |
| ·TSV组织提取液的制备和滴度计算 | 第57-59页 |
| ·TSV攻毒 | 第59页 |
| ·幼体发育表达样品 | 第59页 |
| ·菌株和质粒 | 第59页 |
| ·主要化学试剂与仪器设备 | 第59-60页 |
| ·主要化学试剂 | 第59-60页 |
| ·主要仪器设备 | 第60页 |
| 2. 方法 | 第60-65页 |
| ·总RNA的提取及cDNA第一链的合成 | 第60-62页 |
| ·总RNA的提取 | 第60-61页 |
| ·对虾cDNA第一链的合成 | 第61-62页 |
| ·LvDcrl全长cDNA的克隆 | 第62-64页 |
| ·同源克隆获得部分片断 | 第62页 |
| ·3’RACE | 第62-63页 |
| ·1’RACE | 第63-64页 |
| ·序列分析和系统进化分析 | 第64-65页 |
| ·LvDcrl表达量的测定 | 第65页 |
| 二、结果 | 第65-83页 |
| 1. 凡纳滨对虾LvDcrl基因克隆和结构分析 | 第65-80页 |
| ·凡纳滨对虾LvDcrl基因克隆 | 第66页 |
| ·凡纳滨对虾LvDcrl基因cDNA序列分析 | 第66页 |
| ·凡纳滨对虾LvDcrl基因的蛋白序列及同源性分析 | 第66-78页 |
| ·凡纳滨对虾LvDcrl分子进化研究 | 第78-80页 |
| ·凡纳滨对虾LvDcrl蛋白立体结构预测结构 | 第80页 |
| 2. 凡纳滨对虾LvDcrl组织分布及病毒刺激、幼体发育过程中的表达量变化 | 第80-83页 |
| ·凡纳滨对虾LvDcrl在不同组织中的表达量变化 | 第80-81页 |
| ·病毒刺激后凡纳滨对虾LvDcrl的时序表达量变化 | 第81-82页 |
| ·凡纳滨对虾幼体发育过程中LvDcrl的表达量变化 | 第82-83页 |
| 三、讨论 | 第83-87页 |
| 第二节 病毒侵染后凡纳滨对虾Dicer-1的剪接变异 | 第87-98页 |
| 一、材料方法 | 第87-90页 |
| 1. 材料 | 第87-88页 |
| 2. 方法 | 第88-90页 |
| ·病毒检测 | 第88页 |
| ·内含子剪切变异检测方法 | 第88-90页 |
| ·扩增LvDcrl基因组RNase Ⅲ结构域RIBc-a序列 | 第88-89页 |
| ·制备检测剪接变异的模板 | 第89页 |
| ·检测LvDcrl的mRNA内含子保留 | 第89-90页 |
| ·外显子的选择性拼接的检测方法 | 第90页 |
| ·扩增LvDcrl基因组解旋酶保守域的部分序列 | 第90页 |
| ·检测LvDcrl的mRNA的外显子剪接变异 | 第90页 |
| 二.结果 | 第90-95页 |
| 1. 病毒检测结果 | 第90-91页 |
| 2. 内含子剪切变化 | 第91-93页 |
| 3. 外显子的异常剪接 | 第93-95页 |
| 三.讨论 | 第95-98页 |
| 第三章 结论 | 第98-100页 |
| 参考文献 | 第100-117页 |
| 博士期间发表的论文 | 第117-118页 |
| 致谢 | 第118页 |
