| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-40页 |
| 第一节 无脊椎动物的免疫防御机制 | 第14-21页 |
| 一、非己的识别 | 第15-19页 |
| 1. 病原相关分子模式 | 第15-16页 |
| 2. 模式识别受体 | 第16-19页 |
| (1) C型凝集素 | 第17页 |
| (2) 含硫酯蛋白 | 第17-18页 |
| (3) 肽聚糖识别蛋白 | 第18页 |
| (4) 革兰氏阴性菌结合蛋白 | 第18页 |
| (5) 清道夫受体 | 第18页 |
| (6) 硫依赖型凝集素 | 第18-19页 |
| (7) Toll样受体 | 第19页 |
| 二、免疫信号的调整和放大 | 第19-20页 |
| 三、病原体的清除 | 第20-21页 |
| 第二节 朴体系统概述 | 第21-29页 |
| 一、补体系统研究的历史 | 第21-22页 |
| 二、补体系统的组成成分 | 第22-23页 |
| 三、补体的激活途径 | 第23-28页 |
| 1. 经典途径 | 第24-25页 |
| 2. 替代途径 | 第25-26页 |
| 3. 凝集素途径 | 第26-27页 |
| 4. 终末途径 | 第27-28页 |
| 四、补体的生物学功能 | 第28-29页 |
| 1. 溶细胞效应 | 第28页 |
| 2. 调理作用 | 第28页 |
| 3. 清除免疫复合物 | 第28页 |
| 4. 炎症反应 | 第28-29页 |
| 5. 免疫调节作用 | 第29页 |
| 第三节 无脊椎动物补体样系统研究概况 | 第29-38页 |
| 一、无脊椎动物补体样分子的研究 | 第29-36页 |
| 1. C3 | 第29-32页 |
| 2. C2/Bf | 第32-33页 |
| 3. C1q | 第33-34页 |
| 4. MBL/ficolin | 第34-35页 |
| 5. MASP | 第35页 |
| 6. 其他分子 | 第35-36页 |
| 二、补体系统三条激活途径的进化过程 | 第36-38页 |
| 第四节 本研究的意义和目的 | 第38-40页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第40-57页 |
| 第一节 实验材料 | 第40-42页 |
| 一、实验用扇贝及菌株 | 第40页 |
| 二、扇贝样品的处理 | 第40-41页 |
| 三、主要化学试剂 | 第41页 |
| 四、主要仪器设备 | 第41-42页 |
| 第二节 实验方法 | 第42-57页 |
| 一、扇贝总RNA的提取 | 第42页 |
| 1. 实验用品的预处理 | 第42页 |
| 2. RNA的提取及检测 | 第42页 |
| 二、cDNA文库的构建及序列分析 | 第42-43页 |
| 1. cDNA文库的构建 | 第43页 |
| 2. 序列分析与目的基因片段的获得 | 第43页 |
| 三、RACE技术扩增获得基因全长cDNA序列 | 第43-45页 |
| 1. 扇贝cDNA模板第一链的合成 | 第43-44页 |
| 2. 3’RACE扩增 | 第44-45页 |
| 3. 5’RACE扩增 | 第45页 |
| 四、基因组DNA的提取、检测及定量 | 第45-46页 |
| 1. 基因组DNA的提取 | 第46页 |
| 2. 基因组DNA的检测及定量 | 第46页 |
| 五、PCR扩增基因片段 | 第46-47页 |
| 六、琼脂糖凝胶电泳回收PCR产物 | 第47页 |
| 七、感受态细胞的制备、连接及转化 | 第47-48页 |
| 八、目的基因的生物信息学分析 | 第48页 |
| 九、荧光实时定量PCR | 第48-49页 |
| 十、蛋白的原核重组表达和纯化 | 第49-53页 |
| 1. 质粒的提取 | 第49-50页 |
| 2. 重组质粒的构建 | 第50-51页 |
| 3. 重组蛋白的表达与检测 | 第51页 |
| 4. 重组蛋白的纯化 | 第51-52页 |
| 5. 重组蛋白的复性 | 第52-53页 |
| 6. 重组蛋白的浓度测定 | 第53页 |
| 十一、重组蛋白的活性分析 | 第53-57页 |
| 1. 重组蛋白的凝菌活性 | 第53-54页 |
| 2. 重组蛋白的抑菌活性 | 第54页 |
| 3. 重组蛋白的菌结合活性 | 第54-55页 |
| 4. 重组蛋白的LPS结合活性 | 第55页 |
| 5. 重组蛋白的凝血活性 | 第55-57页 |
| 第三章 实验结果与讨论 | 第57-135页 |
| 第一节 栉孔扇贝含硫酯蛋白(CfTEP)基因的克隆与分析 | 第57-76页 |
| 一、实验结果 | 第57-71页 |
| 1. 栉孔扇贝CfTEP基因的cDNA克隆及序列分析 | 第57-61页 |
| 2. 栉孔扇贝CfTEP基因的同源性和系统进化分析 | 第61-64页 |
| 3. 栉孔扇贝CfTEP基因的组织表达特异性分析 | 第64-65页 |
| 4. 栉孔扇贝CfTEP基因不同转录本序列的克隆 | 第65页 |
| 5. 栉孔扇贝CfTEP基因组序列的克隆和分析 | 第65-70页 |
| 6. 栉孔扇贝CfTEP与部分TEP家族成员基因组序列的比较 | 第70页 |
| 7. 栉孔扇贝CfTEP基因不同转录本对微生物刺激的响应 | 第70-71页 |
| 二、讨论 | 第71-76页 |
| 第二节 栉孔扇贝含C1q结构域蛋白(CfC1qDC)基因的克隆与表达 | 第76-84页 |
| 一、实验结果 | 第76-82页 |
| 1. 栉孔扇贝CfC1qDC基因的克隆及序列分析 | 第76-78页 |
| 2. 栉孔扇贝CfC1qDC基因的同源性分析 | 第78页 |
| 3. 栉孔扇贝CfC1qDC基因的组织表达特异性分析 | 第78-80页 |
| 4. 栉孔扇贝CfC1qDC基因对鳗弧菌刺激的响应 | 第80页 |
| 5. 原代培养栉孔扇贝血淋巴细胞中CfC1qDC基因对LPS刺激的响应 | 第80-81页 |
| 6. 栉孔扇贝CfC1qDC基因的原核重组表达和活性鉴定 | 第81-82页 |
| 二、讨论 | 第82-84页 |
| 第三节 扇贝C型凝集素基因的研究 | 第84-122页 |
| 一、实验结果 | 第84-117页 |
| 1. 栉孔扇贝C型凝集素基因Cflec-3的克隆及重组产物的活性鉴定 | 第84-93页 |
| (1) 栉孔扇贝Cflec-3基因的克隆及序列分析 | 第84-88页 |
| (2) 栉孔扇贝Cflec-3基因的同源性分析 | 第88-89页 |
| (3) 栉孔扇贝Cflec-3中CRD的高级结构预测和分析 | 第89页 |
| (4) 栉孔扇贝Cflec-3基因的组织表达特异性分析 | 第89-90页 |
| (5) 栉孔扇贝Cflec-3对鳗弧菌刺激的响应 | 第90-91页 |
| (6) 栉孔扇贝Cflec-3的原核重组表达 | 第91页 |
| (7) 重组Cflec-3蛋白活性的鉴定 | 第91-93页 |
| 2. 栉孔扇贝C型凝集素基因Cflec-4的克隆及分析 | 第93-101页 |
| (1)栉孔扇贝Cflec-4基因的克隆及序列分析 | 第93-95页 |
| (2) 栉孔扇贝Cflec-4基因的同源性和系统进化分析 | 第95-97页 |
| (3) 栉孔扇贝Cflec-4中四个CRD的高级结构预测和分析 | 第97-99页 |
| (4) 栉孔扇贝Cflec-4基因的组织表达特异性分析 | 第99-101页 |
| 3. 栉孔扇贝C型凝集素基因Cflec-5的克隆及分析 | 第101-108页 |
| (1) 栉孔扇贝Cflec-5基因的克隆及序列分析 | 第101-103页 |
| (2) 栉孔扇贝Cflec-5基因的同源性及系统进化分析 | 第103-105页 |
| (3) 栉孔扇贝Cflec-5基因的组织表达特异性分析 | 第105页 |
| (4) 栉孔扇贝Cflec-5对鳗弧菌刺激的响应 | 第105-107页 |
| (5) 栉孔扇贝Cflec-5的原核重组表达 | 第107页 |
| (6) 重组Cflec-5蛋白活性的鉴定 | 第107-108页 |
| 4. 海湾扇贝C型凝集素基因AiCTL-6的克隆及重组产物的活性鉴定 | 第108-117页 |
| (1) 海湾扇贝AiCTL-6基因的克隆及序列分析 | 第108-111页 |
| (2) 海湾扇贝AiCTL-6基因的同源性及系统进化分析 | 第111-113页 |
| (3) 海湾扇贝AiCTL-6中CRD的高级结构预测和分析 | 第113页 |
| (4) 海湾扇贝AiCTL-6基因的组织表达特异性分析 | 第113-114页 |
| (5) 海湾扇贝AiCTL-6对微生物刺激的响应 | 第114-116页 |
| (6) 海湾扇贝AiCTL-6的原核重组表达 | 第116页 |
| (7) 重组AiCTL-6蛋白活性的鉴定 | 第116-117页 |
| 二、讨论 | 第117-122页 |
| 第四节 海湾扇贝纤维蛋白原相关蛋白(AiFREP)基因的克隆与表达 | 第122-135页 |
| 一、实验结果 | 第122-131页 |
| 1. 海湾扇贝AiFREP基因的克隆及序列分析 | 第122-125页 |
| 2. 海湾扇贝AiFREP基因的同源性分析 | 第125页 |
| 3. 海湾扇贝AiFREP基因的组织表达特异性分析 | 第125-127页 |
| 4. 海湾扇贝AiFREP基因对微生物刺激的响应 | 第127-128页 |
| 5. 海湾扇贝AiFREP基因的原核重组表达 | 第128页 |
| 6. 重组AiFREP蛋白活性的鉴定 | 第128-131页 |
| 二、讨论 | 第131-135页 |
| 第四章 结论 | 第135-138页 |
| 参考文献 | 第138-156页 |
| 博士期间完成和发表的论文 | 第156-160页 |
| GENBANK注册的功能基因 | 第160-161页 |
| 致谢 | 第161页 |
