| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略语表 | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第11-20页 |
| 1.1 细胞骨架 | 第11-12页 |
| 1.2 Keratin 8 | 第12-14页 |
| 1.3 Keratin 8与疾病 | 第14-15页 |
| 1.4 Keratin研究现状 | 第15-16页 |
| 1.5 Keratin 8与糖代谢 | 第16-17页 |
| 1.6 抵抗素 | 第17-18页 |
| 1.7 NF-KB信号途径 | 第18-19页 |
| 1.8 研究目的与意义 | 第19-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-40页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-22页 |
| 2.1.1 实验细胞 | 第20页 |
| 2.1.2 菌株和质粒 | 第20页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第20-21页 |
| 2.1.4 主要溶液试剂配制 | 第21-22页 |
| 2.2 主要实验仪器 | 第22-23页 |
| 2.3 分子生物学软件及相关网站 | 第23页 |
| 2.4 实验方法 | 第23-40页 |
| 2.4.1 细胞培养无菌环境的准备 | 第23-24页 |
| 2.4.2 细胞复苏 | 第24页 |
| 2.4.3 细胞培养与传代 | 第24页 |
| 2.4.4 细胞培养及刺激 | 第24-25页 |
| 2.4.5 总RNA的提取及反转录 | 第25-26页 |
| 2.4.6 细胞基因组DNA的提取 | 第26-27页 |
| 2.4.7 小鼠Keratin 8启动子序列扩增及双荧光真核报告表达载体构建 | 第27-28页 |
| 2.4.8 PCR产物检测与纯化 | 第28-29页 |
| 2.4.9 目的片段的克隆与测序 | 第29-33页 |
| 2.4.10 细胞的瞬时转染 | 第33页 |
| 2.4.11 双荧光素酶报告系统检测 | 第33-35页 |
| 2.4.12 实时荧光定量PCR | 第35-36页 |
| 2.4.13 Pierce(?)BCA蛋白质定量测定 | 第36页 |
| 2.4.14 细胞总糖原检测(检测方法根据试剂盒说明书优化而来) | 第36-37页 |
| 2.4.15 染色质免疫共沉淀 | 第37-39页 |
| 2.4.16 数据统计分析 | 第39-40页 |
| 3 结果与分析 | 第40-50页 |
| 3.1 Resistin抑制HepG2细胞中糖原的积累 | 第40-41页 |
| 3.2 HepG2细胞中敲减K8促进糖原的积累 | 第41页 |
| 3.3 HepG2细胞中敲减K8,resistin对糖原积累的抑制减弱 | 第41-42页 |
| 3.4 Resistin通过p65调控K8的转录 | 第42-45页 |
| 3.4.1 Resistin上调K8 mRNA水平 | 第42-43页 |
| 3.4.2 resistin通过p65调节K8的转录 | 第43-45页 |
| 3.5 p65抑制糖原积累 | 第45-46页 |
| 3.6 小鼠K8启动子的相关研究 | 第46-50页 |
| 3.6.1 小鼠K8基因启动子的扩增及活性分析 | 第46-47页 |
| 3.6.2 小鼠K8基因启动子的顺式作用元件分析 | 第47页 |
| 3.6.3 K8启动子功能分析 | 第47-48页 |
| 3.6.4 p65直接与K8启动子结合调节K8的转录 | 第48-50页 |
| 4 讨论 | 第50-51页 |
| 5 结论与创新点 | 第51-52页 |
| 5.1 结论 | 第51页 |
| 5.2 创新点与不足之处 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-57页 |
| 致谢 | 第57页 |
