| 摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 缩略词表 | 第14-15页 |
| 1 前言 | 第15-35页 |
| 1.1 植物白粉病概况 | 第15-16页 |
| 1.2 植物抗病基因的研究概况 | 第16-22页 |
| 1.2.1 植物防卫反应及植物抗病基因作用机制 | 第16-17页 |
| 1.2.2 抗病基因的分类 | 第17-19页 |
| 1.2.3 抗病基因的克隆手段 | 第19-21页 |
| 1.2.4 抗病基因的定位方法 | 第21页 |
| 1.2.5 抗病基因功能验证的方法 | 第21-22页 |
| 1.3 植物抗真菌病害基因及其应用 | 第22-26页 |
| 1.3.1 几丁质酶基因与β-1,3-葡聚糖酶基因及其应用 | 第22-23页 |
| 1.3.2 rip基因及其应用 | 第23页 |
| 1.3.3 植物抗毒素基因及其应用 | 第23-24页 |
| 1.3.4 SAR基因及其应用 | 第24页 |
| 1.3.5 源自植物自身的抗真菌病基因及其应用 | 第24-26页 |
| 1.3.5.1 rs-afp基因 | 第25页 |
| 1.3.5.2 番茄cf基因 | 第25页 |
| 1.3.5.3 广谱高抗白粉菌的Mlo基因 | 第25-26页 |
| 1.4 月季遗传育种研究概况 | 第26-32页 |
| 1.4.1 月季育种历程 | 第26-27页 |
| 1.4.2 月季种质资源的收集与研究 | 第27-28页 |
| 1.4.3 月季育种方式 | 第28-29页 |
| 1.4.4 月季白粉病抗性育种的研究进展 | 第29-32页 |
| 1.4.4.1 月季白粉病的病原菌、发病规律及寄主-病原关系 | 第29-31页 |
| 1.4.4.2 月季白粉病的抗性鉴定与评价 | 第31-32页 |
| 1.4.4.3 月季白粉病抗性基因的研究 | 第32页 |
| 1.5 本研究的目的、意义和内容 | 第32-35页 |
| 2 四个月季Mlo基因的克隆与序列分析 | 第35-54页 |
| 2.1 实验材料 | 第35-37页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第35-36页 |
| 2.1.2 引物序列 | 第36-37页 |
| 2.1.3 主要仪器及设备 | 第37页 |
| 2.1.4 主要试剂及实验药品 | 第37页 |
| 2.1.5 菌株和载体 | 第37页 |
| 2.2 实验方法 | 第37-42页 |
| 2.2.1 植物材料RNA的提取 | 第37-39页 |
| 2.2.2 cDNA第一链的合成 | 第39页 |
| 2.2.3 RT-PCR扩增、产物克隆及测序 | 第39-40页 |
| 2.2.4 植物材料DNA的提取 | 第40页 |
| 2.2.5 Genomic PCR扩增、产物克隆及测序 | 第40-41页 |
| 2.2.6 四个Mlo基因的序列分析 | 第41-42页 |
| 2.3 结果与分析 | 第42-50页 |
| 2.3.1 植物材料总RNA的检测 | 第42页 |
| 2.3.2 四个月季Mlo基因cDNA全长的获得 | 第42-44页 |
| 2.3.3 植物材料总DNA的检测 | 第44页 |
| 2.3.4 四个月季Mlo基因gDNA全长的获得 | 第44-45页 |
| 2.3.5 四个月季Mlo基因的序列分析 | 第45-50页 |
| 2.4 讨论 | 第50-52页 |
| 2.4.1 月季总RNA及基因组DNA的提取 | 第50-51页 |
| 2.4.2 四个月季Mlo基因的异同 | 第51-52页 |
| 2.4.3 不同作物的Mlo基因 | 第52页 |
| 2.5 小结 | 第52-54页 |
| 3 四个月季Mlo基因的定位研究 | 第54-62页 |
| 3.1 实验材料 | 第54-56页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第54-55页 |
| 3.1.2 引物序列 | 第55-56页 |
| 3.1.3 主要仪器和试剂 | 第56页 |
| 3.2 实验方法 | 第56-57页 |
| 3.2.1 群体材料DNA的提取 | 第56页 |
| 3.2.2 PCR-SSCP扩增 | 第56-57页 |
| 3.2.3 数据统计与软件分析 | 第57页 |
| 3.3 结果与分析 | 第57-60页 |
| 3.3.1 PCR-SSCP扩增结果 | 第57-58页 |
| 3.3.2 四个月季Mlo基因的遗传连锁图 | 第58-60页 |
| 3.4 讨论 | 第60-61页 |
| 3.4.1 PCR-SSCP技术 | 第60页 |
| 3.4.2 四个月季Mlo基因的定位 | 第60-61页 |
| 3.5 小结 | 第61-62页 |
| 4 四个月季Mlo基因的时空表达分析 | 第62-72页 |
| 4.1 实验材料 | 第62-64页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第62-63页 |
| 4.1.2 引物序列 | 第63-64页 |
| 4.1.3 主要仪器与试剂 | 第64页 |
| 4.2 实验方法 | 第64-66页 |
| 4.2.1 植物材料RNA的提取 | 第64页 |
| 4.2.2 cDNA第一链的合成 | 第64-65页 |
| 4.2.3 荧光定量RTFQ-PCR | 第65页 |
| 4.2.4 数据分析 | 第65-66页 |
| 4.3 结果与分析 | 第66-69页 |
| 4.3.1 引物的特异性和扩增效率 | 第66页 |
| 4.3.2 基因在不同组织部位的表达模式 | 第66-68页 |
| 4.3.3 基因在不同处理叶片中的表达模式 | 第68-69页 |
| 4.4 讨论 | 第69-71页 |
| 4.5 小结 | 第71-72页 |
| 5 候选基因RhMLO1 的功能验证 | 第72-90页 |
| 5.1 实验材料 | 第72-73页 |
| 5.1.1 植物材料 | 第72页 |
| 5.1.2 菌株和载体 | 第72页 |
| 5.1.3 主要试剂和仪器 | 第72页 |
| 5.1.4 转化月季的培养基 | 第72-73页 |
| 5.2 实验方法 | 第73-78页 |
| 5.2.1 RhMLO1 两种表达载体的构建 | 第73-75页 |
| 5.2.1.1 RhMLO1 正义表达载体的构建 | 第73-74页 |
| 5.2.1.2 RhMLO1 反义抑制表达载体的构建 | 第74-75页 |
| 5.2.1.3 载体质粒转化和鉴定 | 第75页 |
| 5.2.2 超声波辅助农杆菌介导法转化月季 | 第75-76页 |
| 5.2.3 转基因月季植株标记基因的检测 | 第76页 |
| 5.2.3.1 GUS基因的检测 | 第76页 |
| 5.2.3.2 BAR基因的检测 | 第76页 |
| 5.2.4 转基因月季植株的PCR鉴定 | 第76-77页 |
| 5.2.5 转基因月季植株的实时荧光定量PCR检测 | 第77页 |
| 5.2.6 转基因月季植株的白粉病抗性鉴定 | 第77-78页 |
| 5.3 结果与分析 | 第78-87页 |
| 5.3.1 两种表达载体的双酶切鉴定 | 第78页 |
| 5.3.2 两种表达载体的农杆菌转化 | 第78-79页 |
| 5.3.3 农杆菌转化月季的优化 | 第79-81页 |
| 5.3.4 转基因月季植株的鉴定 | 第81-87页 |
| 5.3.4.1 转基因植株标记基因的检测 | 第81-82页 |
| 5.3.4.2 转基因植株的PCR检测 | 第82-83页 |
| 5.3.4.3 转基因植株的实时荧光定量PCR | 第83-84页 |
| 5.3.4.4 转基因植株的抗性鉴定 | 第84-87页 |
| 5.4 讨论 | 第87-88页 |
| 5.5 小结 | 第88-90页 |
| 6 全文总结与展望 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-105页 |
| 附录 | 第105-109页 |
| 附录1 七对引物的融解曲线图 | 第105-107页 |
| 附录2 七对引物的标准曲线图 | 第107-109页 |
| 作者简历及攻读学位期间发表的学术论文 | 第109-110页 |
| 致谢 | 第110-111页 |
