| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 英文缩略表 | 第12-13页 |
| 第一章 引言 | 第13-20页 |
| 1.1 黏膜免疫概述 | 第13页 |
| 1.1.1 黏膜免疫系统 | 第13页 |
| 1.2 活载体疫苗和乳酸杆菌 | 第13-16页 |
| 1.2.1 乳酸杆菌的益生作用 | 第14页 |
| 1.2.2 乳酸杆菌用于活载体疫苗的优点 | 第14-15页 |
| 1.2.3 重组乳酸菌应用于活载体疫苗的研究 | 第15-16页 |
| 1.3.蹄疫疫苗的研究进展 | 第16-19页 |
| 1.3.1 灭活疫苗 | 第17页 |
| 1.3.2 核酸疫苗 | 第17页 |
| 1.3.3 合成肽疫苗 | 第17-18页 |
| 1.3.4 亚单位疫苗 | 第18页 |
| 1.3.5 活载体疫苗 | 第18页 |
| 1.3.6 新型减毒苗 | 第18-19页 |
| 1.4 总结与展望 | 第19-20页 |
| 第二章 A型FMDV重组表达质粒的构建及在大肠杆菌BL21中的表达 | 第20-32页 |
| 2.1 材料 | 第20-22页 |
| 2.1.1 工具酶和主要试剂 | 第20页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第20页 |
| 2.1.3 试剂的配置 | 第20-22页 |
| 2.2 方法 | 第22-28页 |
| 2.2.1 RNA的提取 | 第22-23页 |
| 2.2.2 RT-PCR | 第23页 |
| 2.2.3 PCR产物的凝胶回收 | 第23-24页 |
| 2.2.4 目的基因的设计与合成 | 第24页 |
| 2.2.5 pUC57-VP1质粒的提取 | 第24页 |
| 2.2.6 革兰氏阳性菌质粒的提取 | 第24-25页 |
| 2.2.7 VP1和pSIP411表达载体双酶切片段的回收 | 第25-26页 |
| 2.2.8 重组质粒pSIP411-VP1的构建 | 第26页 |
| 2.2.9 目的基因VP1与pSIP411质粒的连接 | 第26页 |
| 2.2.10 重组质粒pSIP411-VP1在大肠杆菌DH5α（克隆）和BL21（表达）的转化 | 第26-27页 |
| 2.2.11 重组克隆质粒的提取及鉴定 | 第27页 |
| 2.2.12 重组大肠杆菌的SDS-PAGE分析 | 第27-28页 |
| 2.2.13 重组大肠杆菌Western blot分析 | 第28页 |
| 2.3 结果 | 第28-31页 |
| 2.3.1 VP1序列分析及密码子优化 | 第28-29页 |
| 2.3.2 目的基因的鉴定结果 | 第29页 |
| 2.3.3 重组表达载体pSIP411-VP1的序列 | 第29-30页 |
| 2.3.4 重组大肠杆菌的SDS-PAGE结果分析 | 第30页 |
| 2.3.5 重组大肠杆菌的Western blot结果鉴定 | 第30-31页 |
| 2.4 讨论 | 第31页 |
| 2.5 小结 | 第31-32页 |
| 第三章 A型FMDV重组表达质粒在乳酸杆菌NC8与WCFS1中的表达 | 第32-38页 |
| 3.1 材料 | 第32-33页 |
| 3.1.1 主要仪器 | 第32页 |
| 3.1.2 试剂的配置 | 第32-33页 |
| 3.2 方法 | 第33-34页 |
| 3.2.1 乳酸菌NC8和WCFS1感受态的制备 | 第33页 |
| 3.2.2 乳酸菌的电转化 | 第33页 |
| 3.2.3 乳酸菌质粒的提取 | 第33页 |
| 3.2.4 重组乳酸菌的诱导表达及SDS-PAGE分析 | 第33-34页 |
| 3.2.5 重组乳酸菌Western blot分析 | 第34页 |
| 3.3 结果 | 第34-36页 |
| 3.3.1 重组乳酸杆菌质粒PCR鉴定 | 第34-35页 |
| 3.3.2 重组乳酸杆菌的SDS-PAGE结果鉴定 | 第35页 |
| 3.3.3 重组乳酸杆菌的Western blot结果鉴定 | 第35-36页 |
| 3.4 讨论 | 第36-37页 |
| 3.4.1 表达系统的选择 | 第36页 |
| 3.4.2 电转化方法的确定 | 第36-37页 |
| 3.4.3 重组乳酸杆菌外源蛋白表达条件的优化 | 第37页 |
| 3.5 小结 | 第37-38页 |
| 第四章 重组乳酸杆菌对豚鼠黏膜免疫的效果研究 | 第38-52页 |
| 4.1 材料 | 第38页 |
| 4.1.1 实验动物 | 第38页 |
| 4.1.2 主要仪器及设备 | 第38页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第38页 |
| 4.2 方法 | 第38-42页 |
| 4.2.1 病毒复壮 | 第38页 |
| 4.2.2 对乳鼠组织毒的处理及细胞毒的获取 | 第38-39页 |
| 4.2.3 豚鼠毒的获取 | 第39页 |
| 4.2.4 病毒TCID_50（细胞）的测定 | 第39页 |
| 4.2.5 豚鼠感染FMDV/A/HB/WHHP/13/MF7/GP2豚鼠毒GPID50测定 | 第39页 |
| 4.2.6 动物分组及免疫与攻毒 | 第39-40页 |
| 4.2.7 黏膜样品中（唾液和粪便中）sIgA的检测 | 第40-41页 |
| 4.2.8 血液中IgA、IgG、IgM的检测 | 第41页 |
| 4.2.9 T淋巴细胞亚群CD4+、CD8+的检测 | 第41页 |
| 4.2.10 细胞中和试验 | 第41-42页 |
| 4.2.11 脾淋巴细胞增殖试验 | 第42页 |
| 4.3 结果 | 第42-50页 |
| 4.3.1 细胞病毒TCID_50和豚鼠毒GPID_50的测定结果 | 第42-44页 |
| 4.3.2 黏膜样品中（唾液和粪便中）sIgA的检测结果 | 第44-45页 |
| 4.3.3 血液中IgA、IgG和IgM的检测结果 | 第45-46页 |
| 4.3.4 T淋巴细胞亚群CD4+、CD8+的流式术检测结果 | 第46-47页 |
| 4.3.5 细胞中和试验结果分析 | 第47-48页 |
| 4.3.6 脾淋巴细胞增殖试验结果分析 | 第48-50页 |
| 4.3.7 攻毒保护试验结果 | 第50页 |
| 4.4 讨论 | 第50-51页 |
| 4.5 小结 | 第51-52页 |
| 第五章 全文结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-58页 |
| 附录 | 第58-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 作者简历 | 第60页 |
