| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-23页 |
| 1.1 CRISPR/Cas9系统的起源 | 第13-15页 |
| 1.1.1 CRISPR/Cas系统 | 第13-14页 |
| 1.1.2 基因编辑原理与技术 | 第14-15页 |
| 1.2 CRISPR/Cas9系统的建立 | 第15-16页 |
| 1.3 CRISPR/Cas9系统的缺陷 | 第16页 |
| 1.4 CRISPR/Cas9系统的应用 | 第16-18页 |
| 1.4.1 利用CRISPR/Cas9实现基因编辑 | 第16-17页 |
| 1.4.2 dCas9 | 第17页 |
| 1.4.3 利用CRISPR/Cas9进行高通量筛选 | 第17-18页 |
| 1.4.4 CRISPR/Cas9的其他应用 | 第18页 |
| 1.5 CRISPR/Cas9系统在动物遗传育种方面的应用 | 第18-22页 |
| 1.5.1 提供相关疾病模型 | 第18-20页 |
| 1.5.2 提高动物生产性能 | 第20-22页 |
| 1.6 研究目的与意义 | 第22-23页 |
| 第二章 CRISPR/Cas9基因编辑系统介导的多基因敲除滩羊的制备与评价 | 第23-54页 |
| 2.1 材料方法 | 第23-36页 |
| 2.1.1 试验动物 | 第23-24页 |
| 2.1.2 构建sgRNA的细胞表达载体 | 第24-26页 |
| 2.1.3 利用T7EI酶切分析检测细胞 | 第26-28页 |
| 2.1.4 T-A单克隆测序鉴定突变基因型 | 第28页 |
| 2.1.5 Off-target检测 | 第28-30页 |
| 2.1.6 Cas9 mRNA的体外转录 | 第30页 |
| 2.1.7 sgRNA的体外转录 | 第30-31页 |
| 2.1.8 受精卵胞质注射及胚胎移植 | 第31页 |
| 2.1.9 胚胎基因敲除效率检测 | 第31-32页 |
| 2.1.10 羔羊基因敲除效率检测 | 第32页 |
| 2.1.11 基因敲除滩羊组织基因敲除情况检测 | 第32页 |
| 2.1.12 基因敲除滩羊Off-target检测 | 第32页 |
| 2.1.13 基因敲除滩羊遗传性分析 | 第32页 |
| 2.1.14 免疫荧光分析 | 第32页 |
| 2.1.15 BCO2基因敲除滩羊脂肪颜色鉴定 | 第32-33页 |
| 2.1.16 BCO2基因敲除滩羊脂肪组织靶基因基因分型及转录情况分析 | 第33-34页 |
| 2.1.17 蛋白质印迹分析 | 第34页 |
| 2.1.18 H&E染色 | 第34-35页 |
| 2.1.19 透射电镜分析 | 第35页 |
| 2.1.20 滩羊羔羊的体重测定 | 第35页 |
| 2.1.21 滩羊羔羊的血液生化指标检测 | 第35-36页 |
| 2.2 结果与分析 | 第36-51页 |
| 2.2.1 细胞基因敲除效率验证 | 第36-37页 |
| 2.2.2 胚胎基因敲除效率验证 | 第37-38页 |
| 2.2.3 个体基因敲除效率验证 | 第38-40页 |
| 2.2.4 基因敲除滩羊组织敲除情况分析 | 第40-42页 |
| 2.2.5 基因敲除滩羊脱靶效应检测 | 第42-43页 |
| 2.2.6 基因敲除雄性羔羊遗传性分析 | 第43-45页 |
| 2.2.7 基因敲除滩羊的表型分析 | 第45-51页 |
| 2.3 讨论 | 第51-53页 |
| 2.4 研究结论 | 第53页 |
| 2.5 创新点 | 第53页 |
| 2.6 下一步的研究内容 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-65页 |
| 附录 | 第65-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 作者简介 | 第74页 |
