| 摘要 | 第5-11页 |
| abstract | 第11-15页 |
| 第1章 绪论 | 第25-42页 |
| 1.1 帕金森氏病病因学研究 | 第25-26页 |
| 1.2 PD的致病机理假说 | 第26-33页 |
| 1.2.1 氧化应激学说 | 第26-27页 |
| 1.2.2 线粒体损伤学说 | 第27-28页 |
| 1.2.3 外源性神经毒素致病学说 | 第28-30页 |
| 1.2.4 内源性神经毒素恶性循环假说 | 第30-33页 |
| 1.3 PD的神经免疫病因学研究 | 第33-38页 |
| 1.3.1 胶质细胞在PD神经免疫中的功能研究 | 第33-35页 |
| 1.3.2 外周免疫在PD神经免疫中的功能研究 | 第35-36页 |
| 1.3.3 神经元与T淋巴细胞的相互作用研究 | 第36-38页 |
| 1.4 细胞共培养技术在神经免疫研究中的应用 | 第38-39页 |
| 1.5 本论文的研究目标及主要内容 | 第39-42页 |
| 第2章 材料与方法 | 第42-62页 |
| 2.1 实验仪器与试剂 | 第42-45页 |
| 2.1.1 实验仪器与耗材 | 第42-43页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第43-45页 |
| 2.2 细胞与动物模型的建立 | 第45-49页 |
| 2.2.1 SH-SY5Y、SH-SY5Y-EGFP、SH-SY5Y-WT、SH-SY5Y-A53T、U87、Jurkat/THP1细胞培养以及细胞共培养模型的建立 | 第45-47页 |
| 2.2.2 人源淋巴细胞的培养和共培养模型的建立 | 第47页 |
| 2.2.3 雄性Wistar大鼠NMSal右侧黑质定位损伤的PD模型的建立 | 第47-49页 |
| 2.3 生化分析与影响实验方法 | 第49-58页 |
| 2.3.1 MTT检测法 | 第49页 |
| 2.3.2 MTS检测法 | 第49-50页 |
| 2.3.3 细胞计数 | 第50页 |
| 2.3.4 caspase3活性检测 | 第50页 |
| 2.3.5 caspase8活性检测 | 第50-51页 |
| 2.3.6 FACS检测 | 第51-52页 |
| 2.3.7 实时定量（real-time）PCR | 第52-55页 |
| 2.3.8 蛋白印记检测 | 第55-57页 |
| 2.3.9 酶联免疫吸附测定（ELISA）检测 | 第57页 |
| 2.3.10 激光共聚焦显微镜（CONFOCAL）检测 | 第57页 |
| 2.3.11 透射电镜（TEM）检测 | 第57-58页 |
| 2.3.12 过氧化氢含量（H_2O_2）的检测 | 第58页 |
| 2.3.13 丙二醛（Malondialdehyde，MDA）的检测 | 第58页 |
| 2.4 动物行为学检测 | 第58-59页 |
| 2.4.1 阿普吗啡诱导旋转实验 | 第58-59页 |
| 2.5 动物样品处理及组织切片染色 | 第59-61页 |
| 2.5.1 外周血T淋巴细胞的亚群分型 | 第59-60页 |
| 2.5.2 鼠脑冰冻切片的制备 | 第60页 |
| 2.5.3 多巴胺能神经元的酪氨酸羟化酶（tyrosine hudroxylase，TH）染色 | 第60-61页 |
| 2.6 实验数据与图像处理方法 | 第61-62页 |
| 第3章 实验结果与讨论 | 第62-151页 |
| 3.1 细胞共培养模型的评价 | 第62-68页 |
| 3.1.1 细胞共培养培养基的确定 | 第62-64页 |
| 3.1.2 细胞共培养方式的确定 | 第64页 |
| 3.1.3 细胞共培养接种比例的确定 | 第64-65页 |
| 3.1.4 细胞共培养培养时间的确定 | 第65-67页 |
| 3.1.5 讨论 | 第67-68页 |
| 3.1.6 小结 | 第68页 |
| 3.2 MPP~＋损伤的SH-SY5Y和U87细胞共培养的条件性培养基对Jurkat细胞的影响 | 第68-77页 |
| 3.2.1 MPP~+使用浓度的确定 | 第69页 |
| 3.2.2 500 μM MPP+损伤的条件性培养基可以诱导Jurkat细胞的坏死 | 第69-73页 |
| 3.2.3 100 μM MPP+损伤的条件性培养基可以抑制Jurkat细胞的增殖 | 第73-75页 |
| 3.2.4 讨论 | 第75-77页 |
| 3.2.5 小结 | 第77页 |
| 3.3 Sal和NMSal损伤的SH-SY5Y与U87细胞共培养的条件性培养基对THP1细胞的影响 | 第77-94页 |
| 3.3.1 Sal损伤的SH-SY5Y与U87细胞共培养的条件性培养基对THP1细胞的影响 | 第78-87页 |
| 3.3.1.1 内源性神经毒素Sal使用浓度的确定 | 第78-79页 |
| 3.3.1.2 Sal损伤的条件性培养基中的CCL2化学趋化因子诱导THP1细胞的增殖 | 第79-81页 |
| 3.3.1.3 Sal损伤的条件性培养基诱导的THP1细胞的增殖是通过活化的mTOR信号通路介导的 | 第81-85页 |
| 3.3.1.4 讨论 | 第85-87页 |
| 3.3.1.5 小结 | 第87页 |
| 3.3.2 NMSal损伤的SH-SY5Y与U87细胞共培养的条件性培养基对THP1细胞的影响 | 第87-94页 |
| 3.3.2.1 内源性神经毒素NMSal使用浓度的确定 | 第87-90页 |
| 3.3.2.2 NMSal损伤的条件性培养基可以降低NMSal介导的THP1细胞的凋亡 | 第90-91页 |
| 3.3.2.3 NMSal损伤的条件性培养基可以降低NMSal介导的THP1细胞氧化应激水平 | 第91页 |
| 3.3.2.4 NMSal损伤的条件性培养基可以降低NMSal介导的THP1细胞凋亡相关蛋白表达水平 | 第91-92页 |
| 3.3.2.5 讨论 | 第92-94页 |
| 3.3.2.6 小结 | 第94页 |
| 3.4 内源性神经毒素Sal和NMSal特异损伤的SH-SY5Y细胞在U87细胞的存在下与Jurkat细胞的相互作用 | 第94-125页 |
| 3.4.1 Sal和NMSal损伤的SH-SY5Y和U87细胞的共培养的条件性培养基可以诱导Jurkat细胞的增殖 | 第94-115页 |
| 3.4.1.1 Sal和NMSal对Jurkat细胞的毒性 | 第95-96页 |
| 3.4.1.2 Sal和NMSal损伤的条件性培养基可以诱导Jurkat细胞的增殖 | 第96-101页 |
| 3.4.1.3 Sal和NMSal损伤的条件性培养基诱导Jurkat细胞的增殖是由不同的细胞因子介导的 | 第101-104页 |
| 3.4.1.4 IL-6 单独不能诱导Jurkat细胞的增殖 | 第104页 |
| 3.4.1.5 Sal和NMSal损伤的条件性培养基诱导Jurkat细胞的增殖是通过mTOR信号通路实现的 | 第104-107页 |
| 3.4.1.6 mTOR抑制剂rapamycin抑制了Sal和NMSal损伤的条件性培养基诱导的Jurkat细胞的增殖 | 第107-111页 |
| 3.4.1.7 讨论 | 第111-115页 |
| 3.4.1.8 小结 | 第115页 |
| 3.4.2 Sal和NMSal可以诱导SH-SY5Y-EGFP、U87和Jurkat三种细胞混合培养体系中的SH-SY5Y-EGFP中内源性的 α-syn的聚集 | 第115-125页 |
| 3.4.2.1 Sal和NMSal不能引起单独培养的SH-SY5Y-EGFP细胞中内源性α-syn的聚集 | 第116页 |
| 3.4.2.2 Sal和NMSal不能引起SH-SY5Y-EGFP和U87细胞混合培养体系中SH-SY5Y-EGFP细胞内源性 α-syn的聚集 | 第116-117页 |
| 3.4.2.3 Sal和NMSal可以诱导SH-SY5Y-EGFP、U87和Jurkat细胞混合培养体系中SH-SY5Y-EGFP细胞内源性 α-syn的聚集 | 第117-118页 |
| 3.4.2.4 Sal和NMSal可以诱导SH-SY5Y-EGFP、U87和Jurkat细胞混合培养体系中SH-SY5Y-EGFP细胞自噬标记蛋白LC3的聚集 | 第118-121页 |
| 3.4.2.5 自噬引发剂rapamycin可 以诱导Sal和NMSal处 理的SH-SY5Y-EGFP、U87和Jurkat细胞混合培养体系中SH-SY5Y-EGFP细胞内源性 α-syn聚集减少 | 第121-123页 |
| 3.4.2.6 讨论 | 第123-124页 |
| 3.4.2.7 小结 | 第124-125页 |
| 3.5 内源性神经毒素Sal和NMSal特异损伤的SH-SY5Y细胞在U87细胞存在下与人源外周血淋巴细胞（HPBL）的相互作用 | 第125-137页 |
| 3.5.1 Sal和NMSal损伤的SH-SY5Y和U87细胞共培养的条件性培养基可以诱导人源外周血淋巴细胞（HPBL）细胞的增殖 | 第125-132页 |
| 3.5.1.1 Sal和NMSal损伤的条件性培养基可以诱导HPBL细胞的增殖 | 第125-128页 |
| 3.5.1.2 Sal和NMSal损伤的条件性培养基诱导的HPBL细胞的增殖是通过mTOR信号通路实现的 | 第128-131页 |
| 3.5.1.4 讨论 | 第131-132页 |
| 3.5.1.5 小结 | 第132页 |
| 3.5.2 Sal和NMSal可以诱导SH-SY5Y-EGFP、U87和HPBL三种细胞混合培养体系中的SH-SY5Y-EGFP中内源性 α-syn的聚集 | 第132-137页 |
| 3.5.2.1 Sal和NMSal可以诱导SH-SY5Y-EGFP、U87和HPBL三种细胞混合培养体系中的SH-SY5Y-EGFP中内源性 α-syn的聚集 | 第133页 |
| 3.5.2.2 Sal和NMSal损伤的SH-SY5Y-EGFP、U87和HPBL三种细胞混合培养体系中的SH-SY5Y-EGFP没有发生细胞凋亡或是细胞坏死 | 第133-135页 |
| 3.5.2.3 Sal和NMSal可以诱导SH-SY5Y-EGFP、U87和HPBL三种细胞混合培养体系中的SH-SY5Y-EGFP中LC3蛋白表达水平的上调 | 第135-136页 |
| 3.5.2.4 讨论 | 第136-137页 |
| 3.5.2.5 小结 | 第137页 |
| 3.6 内源性神经毒素NMSal右侧黑质定位损伤的Wistar雄性大鼠PD神经免疫变化 | 第137-151页 |
| 3.6.1 NMSal右侧黑质定位损伤的Wistar雄性大鼠可以引起黑质纹状体区多巴胺能神经元的损伤和 α-syn的聚集 | 第137-141页 |
| 3.6.1.1 Wistar雄性大鼠NMSal右侧黑质定位损伤可以引起大鼠行为学的改变 | 第138页 |
| 3.6.1.2 Wistar雄性大鼠NMSal右侧黑质定位损伤可以诱导黑质纹状体区多巴胺能神经元的损伤 | 第138-139页 |
| 3.6.1.3 Wistar雄性大鼠NMSal右侧黑质定位损伤可以诱导黑质纹状体区多巴胺能神经元 α-syn的聚集 | 第139-140页 |
| 3.6.1.4 讨论 | 第140-141页 |
| 3.6.1.5 小结 | 第141页 |
| 3.6.2 Wistar雄性大鼠内源性神经毒素NMSal右侧黑质定位损伤可以诱导外周血T淋巴细胞的增殖 | 第141-151页 |
| 3.6.2.1 Wistar雄性大鼠NMSal右侧黑质定位损伤可以诱导外周血血浆中细胞因子表达水平的升高 | 第142页 |
| 3.6.2.2 Wistar雄性大鼠NMSal右侧黑质定位损伤可以诱导外周血CD3~+CD4~+、CD3~+CD8~+T淋巴细胞百分比的升高 | 第142-143页 |
| 3.6.2.3 Wistar雄性大鼠NMSal右侧黑质定位损伤可以诱导外周血CD3~+TCRvβ8.2/8.4 和Th2的T淋巴细胞亚型百分比有所增加 | 第143-145页 |
| 3.6.2.4 Wistar雄性大鼠NMSal右侧黑质定位损伤可以诱导外周血CD4~+和CD8~+T淋巴细胞的增殖 | 第145-146页 |
| 3.6.2.5 Wistar雄性大鼠NMSal右侧黑质定位损伤诱导的外周血CD4~+和CD8~+T淋巴细胞的增殖是通过mTOR信号通路活化实现的 | 第146-148页 |
| 3.6.2.6 讨论 | 第148-150页 |
| 3.6.2.7 小结 | 第150-151页 |
| 结论 | 第151-157页 |
| 参考文献 | 第157-177页 |
| 附录 | 第177-178页 |
| 攻读学位期间发表论文与研究成果清单 | 第178-180页 |
| 致谢 | 第180-181页 |
