| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 第1章 文献综述 | 第10-24页 |
| 1.1 CRISPR/Cas系统的发展历程 | 第10页 |
| 1.2 CRISPR/Cas9系统的作用机制 | 第10-12页 |
| 1.3 ZFNS、TALENS基因编辑技术 | 第12-13页 |
| 1.3.1 ZFNs技术 | 第12页 |
| 1.3.2 TALENs技术 | 第12-13页 |
| 1.4 DNA断裂修复机制 | 第13-15页 |
| 1.4.1 NHEJ修复途径 | 第14页 |
| 1.4.2 HR修复途径 | 第14页 |
| 1.4.3 其他修复途径 | 第14-15页 |
| 1.5 CRISPR/Cas9技术优化研究进展 | 第15-19页 |
| 1.5.1 优化Cas9的表达 | 第15-16页 |
| 1.5.2 优化sgRNA结构及表达 | 第16-17页 |
| 1.5.3 tRNA-sgRNA表达系统 | 第17-18页 |
| 1.5.4 其他提高CRISPR/Cas9基因编辑效率的方法 | 第18-19页 |
| 1.6 CRISPR/Cas9技术在重要农作物基因编辑中的应用 | 第19-22页 |
| 1.6.1 CRISPR/Cas9技术在水稻基因编辑中的应用 | 第19-20页 |
| 1.6.2 CRISPR/Cas9技术在小麦基因编辑中的应用 | 第20页 |
| 1.6.3 CRISPR/Cas9技术在玉米基因编辑中的应用 | 第20-21页 |
| 1.6.4 CRISPR/Cas9技术在马铃薯基因编辑中的应用 | 第21-22页 |
| 1.6.5 CRISPR/Cas9技术在番茄基因编辑中的应用 | 第22页 |
| 1.7 甘蓝自交不亲和性及雄性不育 | 第22-24页 |
| 第2章 引言 | 第24-26页 |
| 2.1 研究目的及意义 | 第24-25页 |
| 2.2 研究内容 | 第25页 |
| 2.3 技术路线 | 第25-26页 |
| 第3章 CRISPR/Cas9定点突变甘蓝基因的初步研究 | 第26-42页 |
| 3.1 材料与方法 | 第26-34页 |
| 3.1.1 实验材料与仪器设备 | 第26-28页 |
| 3.1.2 表达载体构建 | 第28-33页 |
| 3.1.3 甘蓝的遗传转化 | 第33页 |
| 3.1.4 突变体筛选及检测 | 第33-34页 |
| 3.2 结果与分析 | 第34-40页 |
| 3.2.1 pCACas9-BoPDS-ABC表达载体的构建 | 第34-35页 |
| 3.2.2 CRISPR/Cas9敲除甘蓝BoPDS基因的T0代转基因植株表型及突变体分析 | 第35-37页 |
| 3.2.3 pCACas9-SRK- ABC表达载体的构建 | 第37页 |
| 3.2.4 CRISPR/Cas9敲除甘蓝SRK基因T0代转基因植株的获得及突变体分析 | 第37-39页 |
| 3.2.5 脱靶效应检测 | 第39-40页 |
| 3.3 讨论 | 第40-42页 |
| 第4章 优化sgRNA结构提高编辑效率的初步研究 | 第42-58页 |
| 4.1 材料与方法 | 第42-46页 |
| 4.1.1 实验材料与仪器设备 | 第42-43页 |
| 4.1.2 优化的CRISPR/Cas9表达载体构建 | 第43-45页 |
| 4.1.3 甘蓝的遗传转化 | 第45页 |
| 4.1.4 烟草的遗传转化 | 第45页 |
| 4.1.5 突变体筛选及检测 | 第45-46页 |
| 4.2 结果与分析 | 第46-55页 |
| 4.2.1 HsgRNA/Cas9、tRNA- HsgRNA/Cas9表达载体构建 | 第46-48页 |
| 4.2.2 HsgRNA/Cas9、tRNA- HsgRNA/Cas9系统在烟草、甘蓝中的活性验证 | 第48-49页 |
| 4.2.3 sgRNA/Cas9、HsgRNA/Cas9、tRNA- HsgRNA/Cas9系统编辑效率比较 | 第49-52页 |
| 4.2.4 tRNA- HsgRNA串联结构中靶位点不同位置编辑效率的比较 | 第52-54页 |
| 4.2.5 脱靶效应检测 | 第54-55页 |
| 4.3 讨论 | 第55-58页 |
| 第5章 总结与后续待研究 | 第58-60页 |
| 5.1 结论 | 第58页 |
| 5.2 创新点 | 第58页 |
| 5.3 后续待研究 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-70页 |
| 附录 | 第70-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
