| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-24页 |
| 1.1 烟草中的生物碱 | 第12-13页 |
| 1.1.1 烟草生物碱的种类含量和功能 | 第12-13页 |
| 1.1.2 烟草生物碱提取及含量测定方法 | 第13页 |
| 1.2 烟草烟碱向降烟碱转化 | 第13-15页 |
| 1.2.1 烟碱转化及其发生的时期、影响因素 | 第13-14页 |
| 1.2.2 转化株与非转化株 | 第14页 |
| 1.2.3 烟草的烟碱转化率水平 | 第14-15页 |
| 1.3 烟碱转化相关基因 | 第15-20页 |
| 1.3.1 CYP82E2、CYP82E3和CYP82E4 | 第16-18页 |
| 1.3.2 CYP82E5v2和CYP82E10 | 第18-19页 |
| 1.3.3 CYP82E21 | 第19-20页 |
| 1.4 降低烟草的烟碱转化率 | 第20-21页 |
| 1.5 CRISPR/Cas9在植物基因组编辑中的应用 | 第21-24页 |
| 第二章 引言 | 第24-26页 |
| 2.1 研究背景及意义 | 第24页 |
| 2.2 研究内容 | 第24-25页 |
| 2.3 技术路线 | 第25-26页 |
| 第三章 烟碱去甲基化酶基因外显子1的克隆 | 第26-32页 |
| 3.1 实验材料 | 第26-27页 |
| 3.1.1 植物材料及载体菌株 | 第26页 |
| 3.1.2 实验仪器设备 | 第26页 |
| 3.1.3 实验试剂 | 第26页 |
| 3.1.4 溶液及培养基配制 | 第26-27页 |
| 3.2 实验方法及步骤 | 第27-29页 |
| 3.2.1 植物培养及叶片基因组提取 | 第27页 |
| 3.2.2 白肋烟TN90、红花大金元以及K326 CYP82E4、CYP82E5v2及CYP82E10基因外显子1克隆 | 第27-29页 |
| 3.2.3 生物信息学分析 | 第29页 |
| 3.3 结果与分析 | 第29-30页 |
| 3.3.1 红花大金元、K326及 白肋烟CYP82E4、CYP82E5v2及CYP82E10基因外显子1克隆 | 第29页 |
| 3.3.2 生物信息学分析 | 第29-30页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第30-32页 |
| 第四章 烟碱去甲基化酶基因敲除植株的获得 | 第32-48页 |
| 4.1 实验材料 | 第32-33页 |
| 4.1.1 植物材料及载体菌株 | 第32页 |
| 4.1.2 实验仪器设备 | 第32页 |
| 4.1.3 实验试剂 | 第32页 |
| 4.1.4 溶液及培养基配制 | 第32-33页 |
| 4.2 实验方法及步骤 | 第33-40页 |
| 4.2.1 基因敲除靶位点设计 | 第33页 |
| 4.2.2 重叠PCR方法构建白肋烟敲除载体 | 第33-36页 |
| 4.2.3 基于Ⅱs型限制性内切酶构建红花大金元、K326敲除载体 | 第36-37页 |
| 4.2.4 农杆菌感受态制备及敲除载体转化农杆菌 | 第37-38页 |
| 4.2.5 叶盘法转化烟草 | 第38-39页 |
| 4.2.6 转基因敲除烟草的鉴定 | 第39-40页 |
| 4.3 结果与分析 | 第40-47页 |
| 4.3.1 敲除靶位点设计与载体构建 | 第40-41页 |
| 4.3.2 农杆菌阳性转化子筛选 | 第41-42页 |
| 4.3.3 阳性转基因植株获得 | 第42-43页 |
| 4.3.4 白肋烟T1代转基因敲除烟草的鉴定 | 第43-44页 |
| 4.3.5 红花大金元、K326 T0代转基因敲除烟草的鉴定 | 第44-45页 |
| 4.3.6 敲除检测统计 | 第45-47页 |
| 4.4 小结与讨论 | 第47-48页 |
| 第五章 白肋烟敲除植株的农艺性状评价及生物碱分析 | 第48-54页 |
| 5.1 实验材料 | 第48页 |
| 5.1.1 植物材料 | 第48页 |
| 5.1.2 实验仪器设备耗材 | 第48页 |
| 5.1.3 实验试剂 | 第48页 |
| 5.2 实验方法及步骤 | 第48-50页 |
| 5.2.1 农艺性状测定 | 第48页 |
| 5.2.2 乙烯利处理诱导叶片衰老 | 第48-49页 |
| 5.2.3 生物碱提取 | 第49页 |
| 5.2.4 生物碱含量测定 | 第49-50页 |
| 5.3 结果与分析 | 第50-52页 |
| 5.3.1 白肋烟敲除植株农艺性状评价 | 第50-51页 |
| 5.3.2 白肋烟敲除植株的诱导衰老 | 第51页 |
| 5.3.3 白肋烟敲除植株生物碱含量分析 | 第51-52页 |
| 5.4 小结讨论 | 第52-54页 |
| 第六章 结论与展望 | 第54-56页 |
| 6.1 主要结论 | 第54页 |
| 6.2 讨论与展望 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-60页 |
| 致谢 | 第60-62页 |
| 硕士期间发表论文及参加课题 | 第62页 |
| 发表论文 | 第62页 |
| 参加课题 | 第62页 |
