中文摘要 | 第1-5页 |
Abstract | 第5-11页 |
第一章 综述 | 第11-27页 |
1 昆虫发育 | 第11-14页 |
·昆虫胚胎发育 | 第11-12页 |
·家蚕胚胎发育 | 第12-14页 |
2 Vasa 研究进展 | 第14-19页 |
·Vasa 同源物的研究 | 第14-18页 |
·vasa 研究意义 | 第18-19页 |
3 发育相关基因vismay 的研究 | 第19-22页 |
·TGF-β信号通路 | 第19-21页 |
·vismay 研究进展 | 第21-22页 |
参考文献 | 第22-27页 |
第二章 课题研究意义及内容 | 第27-29页 |
1 研究意义 | 第27-28页 |
2 研究内容 | 第28-29页 |
第三章 实验材料与方法 | 第29-43页 |
1 实验材料 | 第29-34页 |
·载体与菌种 | 第29页 |
·生物材料 | 第29页 |
·工具酶及试剂盒 | 第29页 |
·其它试剂 | 第29-30页 |
·主要实验试剂与配制 | 第30-34页 |
2 常用仪器 | 第34-35页 |
3 常用实验方法 | 第35-41页 |
·感受态细胞的制备 | 第35页 |
·DNA 的连接反应体系 | 第35页 |
·连接产物的转化 | 第35页 |
·重组质粒的筛选 | 第35页 |
·碱裂解法少量制备质粒DNA | 第35-36页 |
·DNA 的酶切反应体系 | 第36-37页 |
·目的片段的分离和回收 | 第37页 |
·PCR 扩增目的片段 | 第37页 |
·琼脂糖凝胶电泳 | 第37页 |
·SDS-PAGE 蛋白质电泳 | 第37-38页 |
·SDS-PAGE 凝胶的染色和脱色 | 第38页 |
·Western blot | 第38-39页 |
·过柱纯化蛋白 | 第39-40页 |
·免疫小鼠,制备多克隆抗体 | 第40页 |
·RNA 反转录成cDNA | 第40页 |
·细胞的培养和保存 | 第40-41页 |
·定量PCR(Quantitative PCR,qPCR) | 第41页 |
参考文献 | 第41-43页 |
第四章 家蚕vasa-like 基因在雌雄性腺间的表达差异 | 第43-52页 |
1 材料与方法 | 第44-45页 |
·试剂材料 | 第44页 |
·实验方法 | 第44-45页 |
2 结果与分析 | 第45-47页 |
·家蚕vlg 重组表达载体的鉴定 | 第45-46页 |
·BmVLG 重组蛋白的诱导表达 | 第46页 |
·BmVLG 蛋白的过柱纯化 | 第46-47页 |
·家蚕雌雄性腺组织的western blotting 检测 | 第47页 |
3 讨论 | 第47-49页 |
·原核表达重组蛋白的纯化 | 第47-48页 |
·家蚕雌雄性腺组织的western blotting 检测 | 第48-49页 |
参考文献 | 第49-52页 |
第五章 家蚕vlg 的实时定量PCR 分析 | 第52-59页 |
1 材料与方法 | 第52-53页 |
·材料 | 第52-53页 |
·方法 | 第53页 |
2 结果与分析 | 第53-56页 |
·q-PCR 分析Bmvlg 在不同组织中的表达 | 第53-55页 |
·基于基因芯片的BmVLG 的表达谱分析 | 第55-56页 |
3 讨论 | 第56-57页 |
参考文献 | 第57-59页 |
第六章 Bm-VLG 在家蚕细胞中的定位 | 第59-64页 |
1 材料与方法 | 第59-60页 |
·材料 | 第59页 |
·免疫荧光细胞化学试剂 | 第59-60页 |
·免疫荧光检测 | 第60页 |
2 结果与分析 | 第60-61页 |
3 讨论 | 第61-62页 |
参考文献 | 第62-64页 |
第七章 Bmvlg-DsRed 融合蛋白载体的构建和转基因家蚕的制备 | 第64-71页 |
1 材料与方法 | 第65-66页 |
·试剂材料 | 第65页 |
·实验方法 | 第65-66页 |
2 结果与分析 | 第66-68页 |
·Bmvlg - DsRed 的融合蛋白表达载体的构建 | 第66-67页 |
·转基因家蚕的筛选与鉴定 | 第67-68页 |
3 讨论 | 第68-69页 |
参考文献 | 第69-71页 |
第八章 家蚕vis 基因的克隆、组织表达和亚细胞定位 | 第71-84页 |
1 材料与方法 | 第72-74页 |
·材料 | 第72页 |
·Bmvis 基因的克隆及组织表达 | 第72页 |
·Bmvis 基因的生物信息学分析 | 第72-73页 |
·家蚕vis 基因的原核表达载体构建及目的蛋白的诱导表达 | 第73页 |
·重组家蚕Vismay 蛋白的纯化 | 第73页 |
·多克隆抗体的制备 | 第73-74页 |
·SDS-PAGE 和Western blotting | 第74页 |
·Vis 蛋白的亚细胞定位 | 第74页 |
2 结果与分析 | 第74-80页 |
·Bmvis 基因的电子克隆及RT-PCR 获得Bmvis 基因片段 | 第74-75页 |
·Bmvis 基因及其编码氨基酸的序列分析 | 第75-78页 |
·Bmvis 基因在家蚕不同组织中的表达 | 第78-79页 |
·Bmvis 基因的原核表达及western blotting 检测 | 第79页 |
·BmVis 蛋白的亚细胞定位 | 第79-80页 |
3 讨论 | 第80-81页 |
参考文献 | 第81-84页 |
结论 | 第84-85页 |
攻硕期间科研情况 | 第85-86页 |
附录 | 第86-89页 |
致谢 | 第89-90页 |