摘要 | 第7-9页 |
ABSTRACT | 第9-10页 |
缩略语表(ABBREVIATION) | 第11-13页 |
1 文献综述 | 第13-24页 |
1.1 口蹄疫概述 | 第13-18页 |
1.1.1 口蹄疫的危害和流行 | 第13-15页 |
1.1.2 FMDV的临床症状和病理变化 | 第15页 |
1.1.3 FMDV的结构特性 | 第15-16页 |
1.1.4 FMDV的基因组结构及编码蛋白的功能 | 第16-18页 |
1.2 口蹄疫病毒感染宿主细胞 | 第18-19页 |
1.3 口蹄疫疫苗的研究进展 | 第19-22页 |
1.3.1 灭活疫苗 | 第19页 |
1.3.2 蛋白和多肽 | 第19-20页 |
1.3.3 减毒疫苗 | 第20-21页 |
1.3.4 核酸疫苗 | 第21页 |
1.3.5 可饲疫苗 | 第21-22页 |
1.4 杆状病毒研究进展及其在疫苗研究中的应用 | 第22-24页 |
1.4.1 VLPs的概述 | 第22页 |
1.4.2 杆状病毒概述 | 第22-24页 |
2 研究目的和意义 | 第24-25页 |
3 材料和方法 | 第25-37页 |
3.1 实验材料 | 第25-29页 |
3.2 试验方法 | 第29-37页 |
3.2.1 限制性内切酶酶切反应 | 第29页 |
3.2.2 PCR产物或酶切产物的电泳检测 | 第29页 |
3.2.3 酶切产物的回收与纯化 | 第29页 |
3.2.4 回收产物的连接与转化 | 第29-30页 |
3.2.5 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第30页 |
3.2.6 连接产物的转化 | 第30页 |
3.2.7 蓝白斑筛选 | 第30-31页 |
3.2.8 质粒的制备与鉴定 | 第31-32页 |
3.2.9 间接免疫荧光(IFA)检测蛋白的表达 | 第32-33页 |
3.2.10 Western blot检测目的蛋白的表达 | 第33页 |
3.2.11 病毒粒子的电镜观察 | 第33-34页 |
3.2.12 动物试验 | 第34-37页 |
4 结果与分析 | 第37-51页 |
4.1 表达FMDV VP0、VP1、VP3基因的重组杆状病毒rBac-VP130的构建 | 第37-41页 |
4.1.1 重组转移载体pFBDpH-VP130的构建 | 第37-38页 |
4.1.2 重组穿梭载体的鉴定 | 第38页 |
4.1.3 重组病毒的获得及表达产物的检测 | 第38-41页 |
4.2 表达FMDV P1基因的重组杆状病毒rBac-P111的构建 | 第41-44页 |
4.2.1 重组转移载体pFBDpH-P1-P1-P1的构建 | 第41页 |
4.2.2 重组穿梭载体的鉴定 | 第41-42页 |
4.2.3 重组病毒的获得及表达产物的检测 | 第42-44页 |
4.3 表达FMDV衣壳蛋白的重组杆状病毒rBac-P11-3C的构建 | 第44-48页 |
4.3.1 重组转移载体pFBDpH-P11-3C的构建 | 第44-45页 |
4.3.2 重组穿梭载体的鉴定 | 第45-46页 |
4.3.3 重组病毒的获得及表达产物的检测 | 第46-48页 |
4.4 重组杆状病毒rBac-VP130、rBac-P111、rBac-P11-3C的免疫效力试验 | 第48-51页 |
4.4.1 重组杆状病毒的小鼠试验策略 | 第48-49页 |
4.4.2 重组杆状病毒rBac-VP130、rBac-P111、rBac-P11-3C在小鼠体内诱发的体液免疫 | 第49-51页 |
5 讨论 | 第51-55页 |
5.1 转移载体的构建 | 第51页 |
5.2 病毒样颗粒(VLPs)的观察 | 第51-52页 |
5.3 蛋白表达的检测 | 第52-53页 |
5.4 亚单位疫苗诱导的体液免疫反应 | 第53-54页 |
5.5 亚单位疫苗诱导的细胞免疫反应 | 第54-55页 |
6 结论 | 第55-56页 |
参考文献 | 第56-61页 |
致谢 | 第61页 |