| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第1章 绪论 | 第10-17页 |
| 1.1 螺原体的研究概况 | 第10页 |
| 1.1.1 中华绒螯蟹螺原体的发现和证实 | 第10页 |
| 1.2 螺原体侵染机制的研究 | 第10-12页 |
| 1.2.1 中华绒螯蟹螺原体侵染机理的研究 | 第10-12页 |
| 1.3 组织蛋白酶的研究进展 | 第12-14页 |
| 1.3.1 组织蛋白酶简介 | 第12页 |
| 1.3.2 组织蛋白酶的功能研究 | 第12-13页 |
| 1.3.3 组织蛋白酶D的研究进展 | 第13-14页 |
| 1.4 丝氨酸蛋白酶抑制剂3的研究进展 | 第14-15页 |
| 1.4.1 丝氨酸蛋白酶抑制剂3简介 | 第14页 |
| 1.4.2 丝氨酸蛋白酶抑制剂3的功能研究 | 第14-15页 |
| 1.5 本论文的研究目的、内容、意义和技术路线 | 第15-17页 |
| 第2章 中华绒螯蟹组织蛋白酶D的基因克隆、生物信息学分析及蛋白原核表达研究 | 第17-34页 |
| 2.1 材料方法 | 第17-18页 |
| 2.1.1 实验动物和细菌 | 第17页 |
| 2.1.2 主要实验器材及方法 | 第17-18页 |
| 2.2 实验方法 | 第18-24页 |
| 2.2.1 EscatD部分基因的扩增 | 第18-19页 |
| 2.2.2 EscatD全长基因的扩增 | 第19-21页 |
| 2.2.3 序列特征分析 | 第21页 |
| 2.2.4 EscatD基因ORF序列扩增 | 第21-22页 |
| 2.2.5 EscatD基因ORF序列与pET-28a载体连接 | 第22页 |
| 2.2.6 重组质粒转化至克隆感受态细胞中 | 第22页 |
| 2.2.7 菌落PCR筛选阳性克隆及测序分析 | 第22-23页 |
| 2.2.8 重组质粒的原核表达 | 第23页 |
| 2.2.9 重组蛋白过柱纯化 | 第23-24页 |
| 2.2.10 BCA法测定蛋白浓度 | 第24页 |
| 2.2.11 qRT-PCR检测EscatD基因在河蟹各组织中的分布 | 第24页 |
| 2.3 实验结果 | 第24-32页 |
| 2.3.1 EscatD基因全长的扩增 | 第24-25页 |
| 2.3.2 EscatD基因序列特征分析 | 第25-27页 |
| 2.3.3 EscatD基因序列同源性分析 | 第27-29页 |
| 2.3.4 EscatD基因序列进化分析 | 第29-30页 |
| 2.3.5 EscatD基因克隆与原核表达载体的构建 | 第30页 |
| 2.3.6 重组蛋白的表达、纯化与鉴定 | 第30-31页 |
| 2.3.7 EscatD基因在不同组织中的表达 | 第31-32页 |
| 2.4 讨论 | 第32-34页 |
| 第3章 EscatD在螺原体感染过程中的作用研究 | 第34-48页 |
| 3.1 材料方法 | 第34-35页 |
| 3.1.1 主要设备 | 第34-35页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第35页 |
| 3.2 实验方法 | 第35-40页 |
| 3.2.1 qRT-PCR检测EscatD基因在S.eriocheiris刺激后的表达变化情况 | 第35-36页 |
| 3.2.2 EscatD双链RNA的合成及纯化 | 第36-38页 |
| 3.2.3 中华绒螯蟹EscatD基因干扰 | 第38-39页 |
| 3.2.4 EscatD基因下游4个基因的检测 | 第39页 |
| 3.2.5 EscatD基因干扰对于螺原体感染的影响 | 第39-40页 |
| 3.2.6 中华绒螯蟹死亡率统计 | 第40页 |
| 3.3 实验结果 | 第40-46页 |
| 3.3.1 qRT-PCR检测S.eriocheiris刺激后EscatD mRNA的表达变化 | 第40-41页 |
| 3.3.2 EscatD双链RNA的合成 | 第41-42页 |
| 3.3.3 EscatD基因干扰效果检测 | 第42-43页 |
| 3.3.4 EscatD基因干扰对下游基因的影响 | 第43-44页 |
| 3.3.5 EscatD基因干扰对螺原体侵染数量的影响 | 第44-45页 |
| 3.3.6 EscatD基因干扰后感染螺原体统计中华绒螯蟹的死亡率 | 第45-46页 |
| 3.4 讨论 | 第46-48页 |
| 第4章 Esserpin-3在螺原体感染过程中的作用研究 | 第48-57页 |
| 4.1 材料方法 | 第48-49页 |
| 4.1.1 主要设备 | 第48-49页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第49页 |
| 4.2 实验方法 | 第49页 |
| 4.2.1 qRT-PCR检测Esserpin-3基因在S.eriocheiris刺激后的表达变化情况 | 第49页 |
| 4.2.2 Esserpin-3双链RNA合成及纯化 | 第49页 |
| 4.2.3 中华绒螯蟹Esserpin-3基因干扰 | 第49页 |
| 4.2.4 Esserpin-3基因上游2个基因的检测 | 第49页 |
| 4.2.5 Esserpin-3基因干扰对于螺原体感染的影响 | 第49页 |
| 4.2.6 中华绒螯蟹死亡率统计 | 第49页 |
| 4.3 实验结果 | 第49-55页 |
| 4.3.1 qRT-PCR检测S.eriocheiris刺激后Esserpin-3 mRNA的表达变化 | 第49-50页 |
| 4.3.2 Esserpin-3双链RNA的合成及纯化 | 第50-51页 |
| 4.3.3 Esserpin-3基因干扰效果检测 | 第51-52页 |
| 4.3.4 Esserpin-3基因干扰后,RT-PCR检测其上下游基因的变化 | 第52-53页 |
| 4.3.5 Esserpin-3基因干扰对螺原体侵染数量的影响 | 第53-54页 |
| 4.3.6 Esserpin-3基因干扰后感染螺原体统计中华绒螯蟹的死亡率 | 第54-55页 |
| 4.4 讨论 | 第55-57页 |
| 第5章 结论 | 第57-59页 |
| 5.1 中华绒螯蟹组织蛋白酶基因EscatD的克隆、生物信息学分析及蛋白原核表达研究 | 第57页 |
| 5.2 中华绒螫蟹组织蛋白酶基EscatD在螺原体侵染过程中的作用研究 | 第57页 |
| 5.3 中华绒螯蟹丝氨酸蛋白酶抑制剂3基因Esserpin-3在螺原体侵染过程中的作用研究 | 第57-59页 |
| 参考文献 | 第59-67页 |
| 在读期间发表的学术论文及研究成果 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
