| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第9-19页 |
| 1.1 胶质瘤与IDH简介 | 第9-10页 |
| 1.2 IDH基因突变与胶质瘤发病联系 | 第10-11页 |
| 1.3 PCR技术及质谱技术简介 | 第11-14页 |
| 1.3.1 PCR原理与应用 | 第11-12页 |
| 1.3.2 质谱分析及其在核酸领域的应用 | 第12-14页 |
| 1.4 基因突变及其检测技术 | 第14-15页 |
| 1.5 IDH突变与核酸质谱技术的研究进展 | 第15-17页 |
| 1.5.1 胶质瘤IDH基因突变的研究进展 | 第15-16页 |
| 1.5.2 MALDI-TOF质谱技术应用于核酸突变检测的研究进展 | 第16页 |
| 1.5.3 综合进展 | 第16-17页 |
| 1.6 论文研究意义及内容 | 第17-19页 |
| 第二章 材料与方法 | 第19-30页 |
| 2.1 实验材料与仪器 | 第19-22页 |
| 2.1.1 主要试剂及产地 | 第19-20页 |
| 2.1.2 主要仪器及生产公司 | 第20-21页 |
| 2.1.3 主要溶液的配制 | 第21-22页 |
| 2.2 细胞、组织来源及细胞培养 | 第22页 |
| 2.2.1 胶质瘤细胞来源 | 第22页 |
| 2.2.2 胶质瘤组织来源及信息 | 第22页 |
| 2.2.3 胶质瘤细胞培养 | 第22页 |
| 2.3 DNA的提取及其浓度的测定 | 第22-25页 |
| 2.3.1 胶质瘤细胞样品中基因组DNA的提取 | 第22-23页 |
| 2.3.2 胶质瘤组织样品中基因组DNA的提取 | 第23-25页 |
| 2.3.3 核酸浓度及纯度的测定 | 第25页 |
| 2.4 引物设计与PCR反应的优化 | 第25-26页 |
| 2.4.1 引物设计及合成 | 第25-26页 |
| 2.4.2 PCR反应退火温度的优化 | 第26页 |
| 2.4.3 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第26页 |
| 2.5 限制酶酶切反应 | 第26-27页 |
| 2.6 MALDI-TOF质谱检测 | 第27-29页 |
| 2.6.1 MALDI靶板及基质准备 | 第27-28页 |
| 2.6.1.1 靶板的清洗 | 第27-28页 |
| 2.6.1.2 基质的准备 | 第28页 |
| 2.6.2 MALDI-TOF样品的制备 | 第28页 |
| 2.6.3 MALDI-TOF质谱检测 | 第28-29页 |
| 2.7 ESI-Orbitrap质谱验证 | 第29页 |
| 2.8 基因测序验证 | 第29-30页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第30-61页 |
| 3.1 PCR及酶切反应结果 | 第30-34页 |
| 3.1.1 基因组DNA的获得 | 第30-31页 |
| 3.1.2 PCR反应结果及退火温度的选择 | 第31-33页 |
| 3.1.3 限制酶的酶切反应结果 | 第33-34页 |
| 3.2 寡核苷酸序列分子量计算 | 第34-37页 |
| 3.3 MALDI-TOF MS的方法优化 | 第37-51页 |
| 3.3.1 不同MALDI基质对质谱结果的影响 | 第37-46页 |
| 3.3.2 TOF的线性模式与反射模式对结果的影响 | 第46-48页 |
| 3.3.3 MALDI正离子与负离子模式对结果的影响 | 第48页 |
| 3.3.4 不同MALDI激光能量对结果的影响 | 第48-51页 |
| 3.4 方法验证 | 第51-55页 |
| 3.4.1 ESI-Orbitrap MS验证 | 第51-53页 |
| 3.4.2 基因测序比对 | 第53-55页 |
| 3.5 实验方法小结 | 第55页 |
| 3.6 胶质瘤样品突变检测结果 | 第55-61页 |
| 3.6.1 样本信息统计 | 第55-56页 |
| 3.6.2 胶质瘤样本分类与突变信息统计 | 第56-59页 |
| 3.6.3 基因测序结果与比对 | 第59-60页 |
| 3.6.4 胶质瘤样品IDH基因检测结果小结 | 第60-61页 |
| 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 附录 | 第68-73页 |
