| 摘要 | 第5-8页 |
| ABSTRACT | 第8-11页 |
| 缩写词中英文对照 | 第15-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-27页 |
| 1.1 骨骼肌肌纤维类型转化研究进展 | 第17-21页 |
| 1.1.1 骨骼肌肌纤维类型及发育一般规律 | 第17页 |
| 1.1.2 骨骼肌纤维的分类 | 第17-18页 |
| 1.1.3 影响肌纤维类型的因素 | 第18-20页 |
| 1.1.4 肌纤维类型转化相关信号通路 | 第20-21页 |
| 1.2 脂联素及其受体基因简介 | 第21-24页 |
| 1.2.1 脂联素 | 第21-22页 |
| 1.2.2 脂联素受体 | 第22-23页 |
| 1.2.3 脂联素的功能 | 第23-24页 |
| 1.3 白藜芦醇研究进展 | 第24-26页 |
| 1.3.1 白藜芦醇概述 | 第24-25页 |
| 1.3.2 白藜芦醇与肥胖 | 第25页 |
| 1.3.3 白藜芦醇与骨骼肌代谢 | 第25-26页 |
| 1.4 实验研究意义及目的 | 第26-27页 |
| 第二章 陆川猪AdipoQ基因的克隆与功能分析 | 第27-54页 |
| 2.1 实验材料 | 第27-29页 |
| 2.1.1 样品及细胞来源 | 第27页 |
| 2.1.2 载体及菌株 | 第27页 |
| 2.1.3 主要试剂及仪器 | 第27-28页 |
| 2.1.4 试剂的配制 | 第28-29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-40页 |
| 2.2.1 陆川猪背最长肌组织总RNA的提取 | 第29-30页 |
| 2.2.2 cDNA的合成 | 第30-31页 |
| 2.2.3 引物的设计与合成 | 第31页 |
| 2.2.4 AdipoQ基因的PCR扩增 | 第31-32页 |
| 2.2.5 目的片段与pMD18-T载体连接 | 第32页 |
| 2.2.6 pMD18-T- AdipoQ重组质粒的转化 | 第32-33页 |
| 2.2.7 重组质粒的PCR鉴定和测序鉴定 | 第33页 |
| 2.2.8 陆川猪AdipoQ基因的生物信息学分析 | 第33-34页 |
| 2.2.9 pMD18-T-AdipoQ重组质粒与慢病毒载体pLV的双酶切及回收 | 第34页 |
| 2.2.10 胶回收产物的T4连接 | 第34-35页 |
| 2.2.11 pLV-AdipoQ重组慢病毒质粒的转化、筛选、鉴定 | 第35页 |
| 2.2.12 去内毒素质粒的提取 | 第35页 |
| 2.2.13 C2C12细胞的复苏、冻存、传代培养及诱导分化 | 第35-37页 |
| 2.2.14 pLV-AdipoQ和重组gAcrp30分别处理C2C12细胞并诱导分化 | 第37页 |
| 2.2.15 收集细胞提取总RNA反转录为cDNA | 第37-38页 |
| 2.2.16 实时荧光定量PCR | 第38-40页 |
| 2.3 结果与分析 | 第40-51页 |
| 2.3.1 PCR扩增AdipoQ基因结果 | 第40页 |
| 2.3.2 pMD18-T- AdipoQ重组质粒的鉴定结果 | 第40-41页 |
| 2.3.3 AdipoQ基因序列及生物信息学分析结果 | 第41-45页 |
| 2.3.4 pMD18-T- AdipoQ与pLV的双酶切结果 | 第45页 |
| 2.3.5 pLV-AdipoQ重组质粒鉴定结果 | 第45-46页 |
| 2.3.6 转染前细胞形态观察 | 第46页 |
| 2.3.7 pLV-AdipoQ与gAcrp30分别处理C2C12细胞并诱导分化结果 | 第46-49页 |
| 2.3.8 不同处理组诱导分化过程中各基因相对表达结果 | 第49-51页 |
| 2.4 讨论 | 第51-53页 |
| 2.5 小结 | 第53-54页 |
| 第三章 细胞水平研究白藜芦醇对脂联素受体和MyHC基因表达的影响 | 第54-65页 |
| 3.1 实验材料 | 第54-55页 |
| 3.1.1 细胞及载体来源 | 第54页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第54页 |
| 3.1.3 实验仪器 | 第54页 |
| 3.1.4 试剂的配制 | 第54-55页 |
| 3.2 实验方法 | 第55-57页 |
| 3.2.1 不同处理组对C2C12细胞的培养及分化诱导的影响 | 第55-56页 |
| 3.2.2 AdipoR1/2-shRNA干扰慢病毒载体质粒的转化 | 第56页 |
| 3.2.3 AdipoR1/2-shRNA干扰慢病毒载体质粒的鉴定 | 第56页 |
| 3.2.4 去内毒素质粒的提取 | 第56页 |
| 3.2.5 AdipoR1/2-shRNA干扰慢病毒载体的筛选 | 第56页 |
| 3.2.6 白藜芦醇分别处理不同RNAi干扰载体转染的C2C12细胞 | 第56-57页 |
| 3.3 结果与分析 | 第57-62页 |
| 3.3.1 不同组处理C2C12细胞后各基因表达结果 | 第57-59页 |
| 3.3.2 AdipoR1/2-shRNA干扰慢病毒载体质粒筛选结果 | 第59页 |
| 3.3.3 干扰慢病毒载体质粒转染C2C12细胞结果 | 第59-60页 |
| 3.3.4 白藜芦醇对RNAi载体转染的C2C12细胞各基因表达影响 | 第60-62页 |
| 3.4 讨论 | 第62-64页 |
| 3.5 小结 | 第64-65页 |
| 第四章 白藜芦醇对小鼠肌纤维类型转化调控作用的研究 | 第65-76页 |
| 4.1 实验材料 | 第65页 |
| 4.1.1 实验动物 | 第65页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第65页 |
| 4.2 实验方法 | 第65-67页 |
| 4.2.1 实验分组 | 第65页 |
| 4.2.2 实验药品及给药 | 第65-66页 |
| 4.2.3 样本采集 | 第66页 |
| 4.2.4 ELISA方法检测小鼠血清中AdipoQ浓度变化 | 第66页 |
| 4.2.5 骨骼肌组织及脂肪组织总RNA的提取 | 第66-67页 |
| 4.2.6 总RNA反转录为cDNA | 第67页 |
| 4.2.7 实时荧光定量PCR | 第67页 |
| 4.3 结果与分析 | 第67-73页 |
| 4.3.1 小鼠体重及各内脏比重变化 | 第67-69页 |
| 4.3.2 小鼠不同生化指标变化 | 第69页 |
| 4.3.3 白藜芦醇对小鼠白色脂肪组织和肝脏基因表达的影响 | 第69-71页 |
| 4.3.4 白藜芦醇对小鼠血清AdipoQ含量变化的影响 | 第71页 |
| 4.3.5 白藜芦醇对小鼠骨骼肌基因表达的影响 | 第71-73页 |
| 4.4 讨论 | 第73-74页 |
| 4.5 小结 | 第74-76页 |
| 结论 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-91页 |
| 附录 | 第91-93页 |
| 致谢 | 第93-95页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第95页 |
