| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 1 前言 | 第12-23页 |
| 1.1 研究背景 | 第12-20页 |
| 1.1.1 禾谷镰刀菌与小麦赤霉病 | 第12-13页 |
| 1.1.2 DON毒素合成代谢及调控机制的研究 | 第13-15页 |
| 1.1.3 Rab蛋白结构与功能 | 第15-17页 |
| 1.1.4 Rab7与Rab7效应因子研究进展 | 第17-19页 |
| 1.1.5 Retromer复合体的研究概述 | 第19-20页 |
| 1.2 本论文的研究目的及意义 | 第20-21页 |
| 1.3 本论文主要研究内容与创新点 | 第21-23页 |
| 1.3.1 研究内容 | 第21-22页 |
| 1.3.2 创新点 | 第22-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-42页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-25页 |
| 2.1.1 供试菌株 | 第23页 |
| 2.1.2 培养基 | 第23-24页 |
| 2.1.3 常用生化试剂、试剂盒及有关溶液 | 第24页 |
| 2.1.4 抗生素 | 第24页 |
| 2.1.5 仪器与设备 | 第24-25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-42页 |
| 2.2.1 禾谷镰刀菌VPS26、VPS29的生物信息学分析 | 第25-26页 |
| 2.2.2 禾谷镰刀菌野生型PH-1 和FgRab7敲除突变体胞内外DON毒素测定 | 第26页 |
| 2.2.3 VPS26、VPS29与FgRab7的相互作用分析 | 第26-33页 |
| 2.2.3.1 pGBKT7- Rab7-CA激活态诱饵载体的构建 | 第26-29页 |
| 2.2.3.2 pGADT7-VPS26、pGADT7-VPS29融合载体的构建 | 第29-31页 |
| 2.2.3.3 酵母感受态细胞的制备及转化 | 第31-32页 |
| 2.2.3.4 酵母菌株AH109的转化及转化子验证 | 第32页 |
| 2.2.3.5 重组质粒对酵母菌株AH109细胞毒性检测 | 第32页 |
| 2.2.3.6 重组质粒的自激活检测 | 第32-33页 |
| 2.2.3.7 酵母双杂交验证FgRab7失活态、激活态与VPS26、VPS29互作关系 | 第33页 |
| 2.2.4 效应因子VPS26与VPS29在FgRab7突变体中的表达分析 | 第33-36页 |
| 2.2.4.1 RNA提取及纯化 | 第33-34页 |
| 2.2.4.2 RT-PCR反转录 | 第34页 |
| 2.2.4.3 VPS26、VPS29在禾谷镰刀菌PH-1 cDNA中的扩增 | 第34-35页 |
| 2.2.4.4 Real-time荧光定量PCR | 第35-36页 |
| 2.2.5 VPS26的功能分析 | 第36-42页 |
| 2.2.5.1 DNA提取 | 第36页 |
| 2.2.5.2 FgVPS26敲除突变体载体的构建 | 第36-37页 |
| 2.2.5.3 TA克隆 | 第37-38页 |
| 2.2.5.4 原生质体制备及转化 | 第38-39页 |
| 2.2.5.5 FgVPS26敲除突变体的鉴定 | 第39页 |
| 2.2.5.6 FgVPS26互补突变体的构建 | 第39-41页 |
| 2.2.5.7 突变体表型分析 | 第41页 |
| 2.2.5.8 Rab7及VPS29在FgVPS26突变体中的表达分析 | 第41-42页 |
| 3 结果与分析 | 第42-65页 |
| 3.1 VPS26、VPS29的生物信息学分析 | 第42-44页 |
| 3.1.1 VPS26、VPS29蛋白保守域分析 | 第42页 |
| 3.1.2 VPS26、VPS29的亚细胞定位与功能预测 | 第42-44页 |
| 3.2 禾谷镰刀菌野生型PH-1 和FgRab7突变体产生的DON毒素 | 第44-47页 |
| 3.3 禾谷镰刀菌中FgRab7与VPS26、VPS29的相互作用分析 | 第47-55页 |
| 3.3.1 激活态FgRab7的构建 | 第47-49页 |
| 3.3.2 pGBKT7- Rab7-CA诱饵载体、pGADT7-VPS26、pGADT7-VPS29融合载体的构建 | 第49-51页 |
| 3.3.3 重组质粒细胞毒性及自激活检测 | 第51-53页 |
| 3.3.4 pGBKT7- Rab7/Rab7-CA与pGADT7-VPS26、VPS29的相互作用分析 | 第53-55页 |
| 3.4 VPS26、VPS29在FgRab7缺失突变体中的表达 | 第55-57页 |
| 3.4.1 RNA提取及VPS26、VPS29基因在cDNA中的扩增 | 第55-56页 |
| 3.4.2 VPS26、VPS29在FgRab7敲除突变体中的表达 | 第56-57页 |
| 3.5 禾谷镰刀菌VPS26基因的功能分析 | 第57-65页 |
| 3.5.1 FgVPS26基因的敲除 | 第57-59页 |
| 3.5.2 FgVPS26 GFP互补菌株的构建 | 第59页 |
| 3.5.3 FgVPS26敲除突变体表型分析 | 第59-62页 |
| 3.5.4 FgVPS26对DON毒素的影响 | 第62页 |
| 3.5.5 FgRab7及FgVPS29在FgVPS26缺失突变体中的表达 | 第62-65页 |
| 4 小结与讨论 | 第65-68页 |
| 4.1 小结 | 第65页 |
| 4.2 讨论 | 第65-68页 |
| 参考文献 | 第68-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 个人简历 | 第76页 |
