| 摘要 | 第3-6页 |
| ABSTRACT | 第6-9页 |
| 第1章 引言 | 第15-37页 |
| 1.1 MicroRNAs的概述 | 第15-18页 |
| 1.1.1 MicroRNAs的简介 | 第15-16页 |
| 1.1.2 MiRNAs的作用机制 | 第16页 |
| 1.1.3 MiRNAs的生物学功能 | 第16-18页 |
| 1.1.3.1 MiRNAs在细胞发育方面的作用 | 第16-17页 |
| 1.1.3.2 MiRNAs在细胞分化方面的作用 | 第17页 |
| 1.1.3.3 MiRNAs在免疫系统方面的作用 | 第17页 |
| 1.1.3.4 MiRNAs在癌症中的异常表达 | 第17页 |
| 1.1.3.5 MiRNAs作为致癌基因 | 第17-18页 |
| 1.1.3.6 MiRNAs作为抑癌基因 | 第18页 |
| 1.2 末端脱氧核苷酸转移酶 | 第18-21页 |
| 1.2.1 DNA聚合酶简介 | 第18页 |
| 1.2.2 DNA聚合酶的分类 | 第18-19页 |
| 1.2.2.1 A家族 | 第18-19页 |
| 1.2.2.2 B家族 | 第19页 |
| 1.2.2.3 C家族 | 第19页 |
| 1.2.2.4 D家族 | 第19页 |
| 1.2.2.5 Y家族 | 第19页 |
| 1.2.2.6 X家族 | 第19页 |
| 1.2.3 TdTase聚合酶的活性分析 | 第19-21页 |
| 1.2.3.1 非模板依赖的聚合酶活性 | 第19-20页 |
| 1.2.3.2 引物 | 第20页 |
| 1.2.3.3 金属离子依赖性 | 第20页 |
| 1.2.3.4 广泛的底物核苷酸选择性 | 第20页 |
| 1.2.3.5 其他的酶活性 | 第20-21页 |
| 1.3 核酸扩增技术检测miRNAs | 第21-35页 |
| 1.3.1 聚合酶链反应扩增检测技术 | 第22-25页 |
| 1.3.2 滚环扩增检测技术 | 第25-28页 |
| 1.3.3 链置换扩增检测技术 | 第28-30页 |
| 1.3.4 双链特异性酶扩增检测技术 | 第30-32页 |
| 1.3.5 杂交链反应扩增检测技术 | 第32-35页 |
| 1.4 本论文主要研究内容 | 第35-37页 |
| 第2章 基于分支级联酶扩增技术高灵敏均相检测microRNAs | 第37-53页 |
| 2.1 引言 | 第37-38页 |
| 2.2 实验部分 | 第38-41页 |
| 2.2.1 实验材料与试剂 | 第38-39页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第39-40页 |
| 2.2.3 BCEA检测技术的反应步骤 | 第40页 |
| 2.2.4 荧光光谱检测步骤 | 第40页 |
| 2.2.5 凝胶电泳实验条件 | 第40页 |
| 2.2.6 原子力显微镜样品预处理 | 第40页 |
| 2.2.7 细胞培养 | 第40-41页 |
| 2.2.8 总RNA的提取 | 第41页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第41-52页 |
| 2.3.1 BCEA检测技术的实验原理 | 第41-43页 |
| 2.3.2 BCEA检测技术的实验原理验证 | 第43-44页 |
| 2.3.3 考察聚合酶对BCEA反应的影响 | 第44-45页 |
| 2.3.4 MiRNA检测条件的优化 | 第45-48页 |
| 2.3.5 BCEA检测技术的灵敏度分析 | 第48-50页 |
| 2.3.6 BCEA检测技术的特异性分析 | 第50-51页 |
| 2.3.7 BCEA检测技术用于实际样品检测 | 第51-52页 |
| 2.4 小结 | 第52-53页 |
| 第3章 基于Hg~(2+)辅助的双聚合酶等温核酸扩增技术检测microRNAs | 第53-67页 |
| 3.1 引言 | 第53-54页 |
| 3.2 实验部分 | 第54-57页 |
| 3.2.1 实验材料与试剂 | 第54-56页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第56页 |
| 3.2.3 DPINA聚合反应步骤 | 第56页 |
| 3.2.4 T-Hg~(2+)-T双链结构的生成 | 第56页 |
| 3.2.5 荧光光谱检测步骤 | 第56-57页 |
| 3.2.6 凝胶电泳实验条件 | 第57页 |
| 3.2.7 其他实验条件 | 第57页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第57-65页 |
| 3.3.1 Hg~(2+)-DPINA检测方法的实验原理 | 第57-58页 |
| 3.3.2 Hg~(2+)-DPINA检测方法的实验原理验证 | 第58-59页 |
| 3.3.3 考察聚合酶对Hg~(2+)-DPINA反应的影响 | 第59-60页 |
| 3.3.4 Hg~(2+)-DPINA检测技术的实验条件优化 | 第60-62页 |
| 3.3.5 Hg~(2+)-DPINA检测技术的响应性能研究 | 第62-63页 |
| 3.3.6 Hg~(2+)-DPINA检测技术的特异性研究 | 第63-64页 |
| 3.3.7 Hg~(2+)-DPINA分析方法测定细胞溶解产物中的miR-21 | 第64-65页 |
| 3.4 小结 | 第65-67页 |
| 第4章 基于双聚合酶延伸胸腺嘧啶原位生成铜纳米粒子检测microRNAs | 第67-81页 |
| 4.1 引言 | 第67-68页 |
| 4.2 实验部分 | 第68-70页 |
| 4.2.1 实验材料与试剂 | 第68-69页 |
| 4.2.2 实验仪器 | 第69-70页 |
| 4.2.3 EPEPT聚合反应步骤 | 第70页 |
| 4.2.4 PolyT-CuNPs的合成 | 第70页 |
| 4.2.5 荧光光谱检测条件 | 第70页 |
| 4.2.6 凝胶电泳检测条件 | 第70页 |
| 4.2.7 其他实验条件 | 第70页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第70-80页 |
| 4.3.1 EPEPT分析方法的实验原理 | 第70-71页 |
| 4.3.2 EPEPT分析方法实验原理验证 | 第71-73页 |
| 4.3.3 PolyT-CuNPs的形貌表征 | 第73页 |
| 4.3.4 EPEPT机制的性质研究 | 第73-75页 |
| 4.3.5 EPEPT分析方法的实验条件优化 | 第75-78页 |
| 4.3.6 EPEPT分析方法的灵敏度分析 | 第78-79页 |
| 4.3.7 EPEPT分析方法的特异性研究 | 第79页 |
| 4.3.8 EPEPT分析方法的实际样品检测 | 第79-80页 |
| 4.4 小结 | 第80-81页 |
| 第5章 基于富鸟嘌呤DNA敏化Tb~(3+)荧光检测microRNAs | 第81-97页 |
| 5.1 引言 | 第81-82页 |
| 5.2 实验部分 | 第82-85页 |
| 5.2.1 实验材料与试剂 | 第82-83页 |
| 5.2.2 实验仪器 | 第83-84页 |
| 5.2.3 QDs-pDNA的制备 | 第84页 |
| 5.2.4 聚合反应步骤 | 第84页 |
| 5.2.5 对Tb~(3+)荧光敏感的最佳dNTPs比例筛选 | 第84页 |
| 5.2.6 荧光光谱检测 | 第84-85页 |
| 5.2.7 其他实验条件 | 第85页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第85-95页 |
| 5.3.1 分析方法的实验原理 | 第85-86页 |
| 5.3.2 分析方法实验原理验证 | 第86-88页 |
| 5.3.3 QDs-pDNA的表征与分析研究 | 第88-89页 |
| 5.3.4 对Tb~(3+)荧光敏感的最佳dNTPs比例筛选 | 第89-90页 |
| 5.3.5 分析方法的实验条件优化 | 第90-92页 |
| 5.3.6 分析方法的灵敏度分析 | 第92-94页 |
| 5.3.7 分析方法的特异性分析 | 第94页 |
| 5.3.8 分析方法的实际样品检测 | 第94-95页 |
| 5.4 小结 | 第95-97页 |
| 第6章 总结与展望 | 第97-99页 |
| 6.1 总结 | 第97页 |
| 6.2 进一步工作的方向 | 第97-99页 |
| 致谢 | 第99-100页 |
| 参考文献 | 第100-117页 |
| 缩略词表 | 第117-119页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第119页 |
