| 摘要 | 第11-13页 |
| Abstract | 第13-14页 |
| 1 前言 | 第15-26页 |
| 1.1 猪流感 | 第15-19页 |
| 1.1.1 猪流感病毒形态结构 | 第15-16页 |
| 1.1.2 猪流感病毒基因组结构和编码蛋白的功能 | 第16-17页 |
| 1.1.3 猪流感病毒遗传演化 | 第17页 |
| 1.1.4 古典H1N1亚型流感病毒 | 第17页 |
| 1.1.5 禽源H1N1亚型流感病毒 | 第17-18页 |
| 1.1.6 重组的H3N2、H1N2和H1N1亚型流感病毒 | 第18-19页 |
| 1.2 猪流感疫苗概况 | 第19-24页 |
| 1.2.1 灭活疫苗 | 第19-20页 |
| 1.2.2 弱毒疫苗 | 第20-21页 |
| 1.2.3 亚单位疫苗 | 第21-22页 |
| 1.2.4 活载体疫苗 | 第22页 |
| 1.2.5 核酸疫苗 | 第22-23页 |
| 1.2.6 通用型疫苗 | 第23-24页 |
| 1.3 培养制备流感疫苗概况 | 第24-26页 |
| 1.3.1 鸡胚培养 | 第24页 |
| 1.3.2 MDCK细胞培养 | 第24-25页 |
| 1.3.3 Vero细胞培养 | 第25-26页 |
| 2 材料与方法 | 第26-46页 |
| 2.1 试验材料 | 第26-28页 |
| 2.1.1 毒株和质粒 | 第26页 |
| 2.1.2 细胞、菌种和鸡胚 | 第26页 |
| 2.1.3 试验动物 | 第26页 |
| 2.1.4 主要试剂 | 第26-27页 |
| 2.1.5 主要仪器设备 | 第27页 |
| 2.1.6 主要溶液试剂的配置 | 第27-28页 |
| 2.2 试验方法 | 第28-46页 |
| 2.2.1 重组质粒的构建 | 第28-32页 |
| 2.2.1.1 引物的设计和合成 | 第28页 |
| 2.2.1.2 病毒RNA的提取和cDNA合成 | 第28-29页 |
| 2.2.1.3 病毒HA和NA基因的扩增 | 第29页 |
| 2.2.1.4 扩增产物的回收、鉴定和纯化 | 第29-30页 |
| 2.2.1.5 载体和HA、NA基因片段的酶切 | 第30-31页 |
| 2.2.1.6 载体和HA、NA基因片段的连接 | 第31页 |
| 2.2.1.7 目的基因和载体的转化 | 第31页 |
| 2.2.1.8 重组质粒SH1/PR8的鉴定 | 第31-32页 |
| 2.2.2 重组H1N1亚型猪流感病毒SH1/PR8的拯救 | 第32-34页 |
| 2.2.2.1 重组质粒的提取 | 第32-33页 |
| 2.2.2.2 重组质粒的转染 | 第33页 |
| 2.2.2.3 重组病毒SH1/PR8的鉴定 | 第33-34页 |
| 2.2.3 重组病毒SH1/PR8和原始病毒SH1在MDCK细胞上生长曲线的测定 | 第34-35页 |
| 2.2.3.1 SH1/PR8和SH1的TCID50检测 | 第34-35页 |
| 2.2.3.2 SH1/PR8和SH1的HA效价检测 | 第35页 |
| 2.2.4 SH1/PR8和SH1在MDCK细胞上蚀斑的检测 | 第35-36页 |
| 2.2.5 重组H1N1亚型SIV单价灭活疫苗的制备 | 第36页 |
| 2.2.6 动物试验 | 第36-43页 |
| 2.2.6.1 小鼠试验 | 第36-37页 |
| 2.2.6.2 HI抗体效价检测 | 第37-38页 |
| 2.2.6.3 血清中和抗体效价检测 | 第38页 |
| 2.2.6.4 血清中特异性IgG抗体效价检测 | 第38-39页 |
| 2.2.6.5 攻毒后第 3、5 天肺脏组织病毒含量检测及病理学观察 | 第39-40页 |
| 2.2.6.6 攻毒后14天小鼠体重和存活率的变化 | 第40页 |
| 2.2.6.7 猪试验 | 第40-41页 |
| 2.2.6.8 血清中抗体的检测 | 第41-42页 |
| 2.2.6.9 攻毒后第5天鼻拭子、鼻甲骨和肺泡灌洗液病毒含量检测 | 第42页 |
| 2.2.6.10 攻毒后第5天猪肺脏组织病理学观察 | 第42-43页 |
| 2.2.7 重组H1N1亚型SIV二价灭活疫苗的制备及免疫保护评价 | 第43-46页 |
| 2.2.7.1 重组病毒G11/PR8和原始病毒G11生长曲线的测定 | 第43页 |
| 2.2.7.2 G11/PR8和G11的TCID50检测 | 第43页 |
| 2.2.7.3 G11/PR8和G11的HA效价检测 | 第43页 |
| 2.2.7.4 重组H1N1亚型SIV二价灭活疫苗的制备 | 第43页 |
| 2.2.7.5 小鼠试验 | 第43-44页 |
| 2.2.7.6 HI抗体效价检测 | 第44-45页 |
| 2.2.7.7 血清中和抗体效价检测 | 第45页 |
| 2.2.7.8 血清中特异性IgG抗体效价检测 | 第45页 |
| 2.2.7.9 攻毒后第 3、5 天肺脏组织病毒含量检测及病理学观察 | 第45页 |
| 2.2.7.10 攻毒后14天小鼠体重和存活率的变化 | 第45-46页 |
| 3 结果与分析 | 第46-68页 |
| 3.1 重组质粒的构建 | 第46-47页 |
| 3.1.1 原始病毒SH1的HA和NA基因扩增 | 第46页 |
| 3.1.2 重组质粒PBD-HA和PBD-NA菌液PCR鉴定 | 第46-47页 |
| 3.1.3 重组质粒的测序鉴定 | 第47页 |
| 3.2 重组H1N1亚型猪流感病毒SH1/PR8的拯救 | 第47页 |
| 3.3 拯救的重组H1N1亚型猪流感病毒SH1/PR8的鉴定 | 第47-48页 |
| 3.4 SH1/PR8和在MDCK细胞上的生长曲线 | 第48-49页 |
| 3.4.1 SH1/PR8和SH1的TCID50检测 | 第48页 |
| 3.4.2 SH1/PR8和SH1的HA效价检测 | 第48-49页 |
| 3.5 SH1/PR8和SH1在MDCK细胞上蚀斑的大小 | 第49-50页 |
| 3.6 重组H1N1亚型SIV单价灭活疫苗的保护效力评价 | 第50-59页 |
| 3.6.1 小鼠试验结果 | 第50页 |
| 3.6.2 HI抗体效价 | 第50-51页 |
| 3.6.3 血清中和抗体效价 | 第51页 |
| 3.6.4 血清中特异性IgG抗体效价 | 第51-52页 |
| 3.6.5 攻毒后第 3、5 天小鼠肺脏组织病毒含量 | 第52-53页 |
| 3.6.6 攻毒后第5天肺脏组织病理学的变化 | 第53-54页 |
| 3.6.7 攻毒后14天小鼠体重的变化 | 第54页 |
| 3.6.8 攻毒后14天小鼠存活率的变化 | 第54-55页 |
| 3.6.9 猪试验结果 | 第55页 |
| 3.6.10 猪血清中的抗体的效价 | 第55-57页 |
| 3.6.11 攻毒后第5天猪鼻试子、鼻甲骨和肺泡灌洗液病毒的含量 | 第57-58页 |
| 3.6.12 攻毒后第5天猪肺脏病变观察 | 第58-59页 |
| 3.7 重组H1N1亚型SIV二价灭活疫苗的制备及保护效力评价 | 第59-68页 |
| 3.7.1 重组病毒G11/PR8和原始病毒G11在MDCK细胞上的生长曲线 | 第59-60页 |
| 3.7.2 小鼠试验结果 | 第60页 |
| 3.7.3 HI抗体效价 | 第60-61页 |
| 3.7.4 血清中和抗体效价 | 第61-62页 |
| 3.7.5 血清中特异性IgG抗体效价 | 第62-63页 |
| 3.7.6 攻毒后第 3、5 天肺脏组织病毒的含量 | 第63-64页 |
| 3.7.7 攻毒后第5天肺脏组织病理学变化 | 第64-66页 |
| 3.7.8 毒后14天小鼠体重的变化 | 第66-67页 |
| 3.7.9 攻毒后14天小鼠存活率的变化 | 第67-68页 |
| 4 讨论 | 第68-70页 |
| 5 结论 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第81页 |
