| 中文摘要 | 第10-12页 |
| ABSTRACT | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-23页 |
| 1.1 蛋白质合成终止 | 第14页 |
| 1.2 肽链释放因子 | 第14-19页 |
| 1.2.1 肽链释放因子的种类 | 第14页 |
| 1.2.2 肽链释放因子的结构特征 | 第14-16页 |
| 1.2.3 蛋白质合成终止过程中第一类肽链释放因子的作用机制 | 第16-19页 |
| 1.2.4 第二类肽链释放因子的多功能性 | 第19页 |
| 1.3 Survivin蛋白 | 第19-20页 |
| 1.4 毕赤酵母表达系统 | 第20-21页 |
| 1.5 八肋游仆虫、蓝氏贾第鞭毛虫和滴虫的特点及本课题的研究意义 | 第21-23页 |
| 1.5.1 八肋游仆虫 | 第21页 |
| 1.5.2 蓝氏贾第鞭毛虫 | 第21页 |
| 1.5.3 滴虫 | 第21页 |
| 1.5.4 本课题的研究意义 | 第21-23页 |
| 第二章 人类eRF3a与survivin相互作用的结构域分析 | 第23-35页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-25页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第23页 |
| 2.1.2 酶、生化试剂、引物合成和测序 | 第23-24页 |
| 2.1.3 主要试剂的配制 | 第24-25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-31页 |
| 2.2.1 寡聚核苷酸 | 第25页 |
| 2.2.2 原核重组表达质粒和酵母双杂交重组质粒的构建 | 第25-26页 |
| 2.2.3 酵母双杂交实验 | 第26-29页 |
| 2.2.4 Pull-down体外分析蛋白间的相互作用关系 | 第29-31页 |
| 2.3 实验结果 | 第31-34页 |
| 2.3.1 原核重组表达质粒和酵母双杂交重组质粒的构建 | 第31页 |
| 2.3.2 酵母双杂交验证eRF3a的截短体与survivin的相互作用 | 第31-32页 |
| 2.3.3 融合蛋白GST-eRF3a(1-72aa)、GST-eRF3a(1-36aa)和His-survivin的诱导表达 | 第32-33页 |
| 2.3.4 Pull-down分析eRF3a截短体与survivin的相互作用 | 第33-34页 |
| 2.4 讨论 | 第34-35页 |
| 第三章 肽链释放因子的真核表达 | 第35-51页 |
| 3.1 实验材料 | 第35-37页 |
| 3.1.1 菌株和质粒 | 第35页 |
| 3.1.2 酶、生化试剂、引物合成和测序 | 第35-36页 |
| 3.1.3 主要试剂的配制 | 第36-37页 |
| 3.2 实验方法 | 第37-43页 |
| 3.2.1 寡聚核苷酸 | 第37页 |
| 3.2.2 酵母重组表达质粒的构建和突变 | 第37-39页 |
| 3.2.3 质粒的大量提取 | 第39-41页 |
| 3.2.4 肽链释放因子在毕赤酵母GS115中的表达 | 第41-43页 |
| 3.3 实验结果 | 第43-50页 |
| 3.3.1 Eo-eRF1a基因的优化 | 第43-44页 |
| 3.3.2 真核重组表达质粒的构建 | 第44-45页 |
| 3.3.3 重组质粒的定点突变 | 第45-46页 |
| 3.3.4 重组质粒的线性化 | 第46-47页 |
| 3.3.5 阳性克隆的筛选 | 第47-48页 |
| 3.3.6 目的蛋白的诱导表达 | 第48-50页 |
| 3.4 讨论 | 第50-51页 |
| 第四章 eRF1 N端结构域的原核表达 | 第51-60页 |
| 4.1 实验材料 | 第51-52页 |
| 4.1.1 菌株和质粒 | 第51页 |
| 4.1.2 酶、生化试剂、引物合成和测序 | 第51页 |
| 4.1.3 主要试剂的配制 | 第51-52页 |
| 4.2 实验方法 | 第52-56页 |
| 4.2.1 寡聚核苷酸 | 第52页 |
| 4.2.2 原核重组表达质粒的构建 | 第52-55页 |
| 4.2.3 eRF1 N端结构域在大肠杆菌中的表达 | 第55-56页 |
| 4.2.4 Western blot分析鉴定 | 第56页 |
| 4.3 实验结果 | 第56-58页 |
| 4.3.1 Eo-eRF1b-N、Tt-eRF1-N和Gl-eRF1-N基因的克隆 | 第56页 |
| 4.3.2 重组克隆质粒的构建 | 第56-57页 |
| 4.3.3 原核重组表达质粒的构建 | 第57页 |
| 4.3.4 融合蛋白的表达 | 第57-58页 |
| 4.3.5 融合蛋白的Western Blotting鉴定 | 第58页 |
| 4.4 讨论 | 第58-60页 |
| 总结与展望 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-66页 |
| 附录 | 第66-67页 |
| 攻读硕士期间取得的研究成果 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 个人简介及联系方式 | 第69-71页 |
