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磁性纳米颗粒精子介导构建PID1转基因猪

摘要第1-10页
Abstract第10-13页
1 引言第13-28页
   ·猪肉生产与肉质第13页
   ·肌内脂肪第13-16页
     ·影响肌内脂肪的因素第14-15页
     ·影响肌内脂肪的相关基因第15-16页
   ·PID1基因研究现状第16-17页
   ·动物转基因技术第17-19页
     ·显微注射法第17-18页
     ·逆转录病毒载体法第18页
     ·胚胎干细胞介导法第18-19页
     ·体细胞核移植法第19页
   ·精子介导转基因第19-22页
     ·精子介导转基因的机理第19-20页
     ·精子介导转基因的方法第20-22页
   ·磁性纳米颗粒转染第22-24页
   ·转基因动物检测方法第24-26页
     ·可视化识别检测第24页
     ·基因组(DNA)水平检测第24-25页
     ·转录(RNA)水平检测第25页
     ·翻译(蛋白质)水平检测第25-26页
     ·生物活性功能检测第26页
   ·动物转基因技术的应用及存在的问题第26-27页
     ·转基因技术的应用第26页
     ·动物转基因技术存在的问题第26-27页
   ·本研究的目的、意义第27-28页
2 材料与方法第28-59页
   ·试验材料第28-35页
     ·试验动物与样品采集第28页
     ·主要仪器设备第28-29页
     ·主要试剂及耗材第29-31页
     ·主要试剂的配制第31-34页
     ·主要数据库及生物软件第34-35页
   ·试验方法第35-59页
     ·重组质粒的扩增与提取第35-38页
     ·精子介导制备转基因猪第38-39页
     ·出生仔猪标记及基因组提取第39-40页
     ·PCR检测阳性率第40-41页
       ·引物设计第40页
       ·PCR扩增第40-41页
     ·Southern blot检测阳性率第41-46页
     ·转基因猪外源基因转录水平测定第46-50页
     ·转基因猪外源基因翻译水平检测第50-54页
     ·转基因猪生物功能检测第54-56页
     ·荧光定量PCR检测外源基因拷贝数第56-58页
     ·转基因猪安全性的检测第58页
     ·数据分析第58-59页
3 结果与分析第59-75页
   ·质粒PCR重鉴定第59页
   ·精子介导制备转基因猪第59-60页
   ·PCR检测阳性率第60-61页
   ·Southern blot检测阳性率第61-63页
     ·探针模板制备及标记效率检测第61页
     ·阳性率检测第61-63页
   ·转基因猪外源基因转录水平测定第63-66页
     ·总RNA提取以及mRNA反转录第63-64页
     ·荧光定量PCR检测第64-66页
   ·转基因猪外源基因翻译水平检测第66-68页
     ·绿色荧光蛋白检测第66-67页
     ·组织间PID1蛋白差异第67-68页
   ·试验猪肉质测定第68-69页
   ·外源基因拷贝数检测第69-72页
     ·标准曲线方程的建立第69-71页
     ·转基因猪外源基因拷贝数分析第71页
     ·荧光定量PCR检测与Southern blot分析转基因拷贝数比较第71-72页
   ·转基因猪生长发育及安全性的检测第72-75页
     ·转基因猪生长发育情况第72-73页
     ·PCR检测外源基因的逃逸情况第73-74页
     ·精液品质检测第74页
     ·F0代留种猪繁殖情况第74-75页
4 讨论第75-79页
   ·转基因方法的选择第75页
   ·转基因检测方法第75-77页
   ·PID1基因表达情况第77-78页
   ·转基因安全性问题第78-79页
5 结论第79-80页
参考文献第80-87页
致谢第87-88页
攻读学位期间发表论文情况第88页

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