| 摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-27页 |
| ·丝氨酸羟甲基转移酶的研究概况 | 第15-18页 |
| ·丝氨酸羟甲基转移酶的分布 | 第18-19页 |
| ·丝氨酸羟甲基转移酶的结构和反应机制 | 第19-20页 |
| ·丝氨酸羟甲基转移酶的进化 | 第20页 |
| ·丝氨酸羟甲基转移酶的研究进展 | 第20-27页 |
| ·SHMT的甲醛同化作用 | 第21页 |
| ·SHMT的结构调控作用 | 第21页 |
| ·SHMT在癌症方面的研究进展 | 第21-22页 |
| ·SHMT的癌症抑制剂 | 第22-23页 |
| ·SHMT在植物中的研究进展 | 第23-24页 |
| ·SHMT在昆虫和原生动物中的研究进展 | 第24-27页 |
| 第二章 引言 | 第27-29页 |
| ·研究背景及意义 | 第27页 |
| ·研究内容 | 第27-28页 |
| ·技术路线 | 第28-29页 |
| 第三章 BmSHMT基因的生物信息学分析及表达特征 | 第29-41页 |
| ·材料和试剂 | 第29-30页 |
| ·实验材料 | 第29页 |
| ·主要试剂 | 第29-30页 |
| ·主要仪器 | 第30页 |
| ·方法与步骤 | 第30-33页 |
| ·家蚕BmSHMT基因的鉴定 | 第30页 |
| ·家蚕BmSHMT基因的芯片数据表达分析 | 第30页 |
| ·家蚕BmSHMT基因ORF序列的确定和生物信息学分析 | 第30页 |
| ·家蚕样品总RNA的提取 | 第30-31页 |
| ·RNA的检测 | 第31页 |
| ·总RNA基因组的消化 | 第31页 |
| ·cDNA的制备和检测 | 第31-32页 |
| ·BmSHMT基因转录水平的qRT-PCR | 第32-33页 |
| ·BmSHMT基因5’上游序列分析 | 第33页 |
| ·结果与分析 | 第33-40页 |
| ·家蚕BmSHMT基因的鉴定 | 第33页 |
| ·家蚕BmSHMT基因芯片数据表达谱分析 | 第33-34页 |
| ·家蚕BmSHMT基因ORF序列的确定和生物信息学分析 | 第34-35页 |
| ·家蚕BmSHMT基因的进化关系分析和氨基酸序列比对 | 第35-37页 |
| ·家蚕BmSHMT基因的表达谱检测 | 第37-38页 |
| ·SHMT基因在872和Nd品种中的表达谱检测 | 第38-39页 |
| ·5’上游序列分析 | 第39-40页 |
| ·讨论 | 第40-41页 |
| 第四章 家蚕BmSHMT基因的全长克隆、原核表达纯化及多克隆抗体制备 | 第41-55页 |
| ·材料与试剂 | 第41-45页 |
| ·表达载体与表达菌株 | 第41页 |
| ·实验试剂 | 第41页 |
| ·实验仪器 | 第41-42页 |
| ·引物 | 第42页 |
| ·主要溶剂及配制 | 第42-45页 |
| ·实验方法 | 第45-51页 |
| ·家蚕BmSHMT基因的全长克隆 | 第45-47页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第47-48页 |
| ·原核表达 | 第48-49页 |
| ·目的蛋白纯化 | 第49-51页 |
| ·结果与分析 | 第51-53页 |
| ·家蚕BmSHMT基因的全长克隆 | 第51页 |
| ·原核表达重组质粒的构建 | 第51-52页 |
| ·原核表达目的蛋白 | 第52页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第52-53页 |
| ·讨论 | 第53-55页 |
| 第五章 BmSHMT的Western Blot验证和亚细胞定位 | 第55-61页 |
| ·材料与试剂 | 第55-56页 |
| ·材料 | 第55页 |
| ·试剂 | 第55页 |
| ·主要仪器 | 第55页 |
| ·主要溶液配制 | 第55-56页 |
| ·方法与步骤 | 第56-59页 |
| ·Western Blot验证 | 第56-57页 |
| ·免疫荧光定位 | 第57-59页 |
| ·结果与分析 | 第59-60页 |
| ·Western Blot验证 | 第59页 |
| ·免疫荧光定位 | 第59-60页 |
| ·讨论 | 第60-61页 |
| 第六章 家蚕BmSHMT的酶活检测 | 第61-71页 |
| ·材料与试剂 | 第61-62页 |
| ·酶活测定中需要的酶 | 第61页 |
| ·实验试剂 | 第61页 |
| ·实验仪器 | 第61页 |
| ·主要溶剂配制 | 第61-62页 |
| ·方法 | 第62-66页 |
| ·MTHFD-2的克隆 | 第62-64页 |
| ·MTHFD-2的原核表达 | 第64页 |
| ·MTHFD-2的纯化 | 第64页 |
| ·BmSHMT酶活测定 | 第64-66页 |
| ·结果分析 | 第66-68页 |
| ·MTHFD-2的克隆 | 第66页 |
| ·MTHFD-2的原核表达检测 | 第66-67页 |
| ·MTHFD-2的纯化 | 第67页 |
| ·BmSHT的酶活测定 | 第67-68页 |
| ·L-Ser和THF的Km测定 | 第68页 |
| ·BmSHMT和其他物种酶活性的比较 | 第68页 |
| ·讨论 | 第68-71页 |
| 第七章 家蚕BmSHMT的定点突变及酶活测定 | 第71-79页 |
| ·材料与试剂 | 第71-72页 |
| ·实验材料 | 第71页 |
| ·主要试剂 | 第71页 |
| ·主要仪器 | 第71-72页 |
| ·引物 | 第72页 |
| ·主要溶剂及配制 | 第72页 |
| ·方法和步骤 | 第72-74页 |
| ·定点突变位点的鉴定 | 第72页 |
| ·设计定点突变位点引物 | 第72-73页 |
| ·突变型BmSHMT的克隆 | 第73-74页 |
| ·原核表达和纯化 | 第74页 |
| ·酶活检测 | 第74页 |
| ·结果 | 第74-77页 |
| ·BmSHMT和HcSHMT氨基酸序列比对 | 第74-75页 |
| ·候选位点的定点突变 | 第75页 |
| ·突变型BmSHMT的诱导表达 | 第75-76页 |
| ·突变型BmSHMT的纯化 | 第76页 |
| ·突变型BmSHMT的酶活检测 | 第76-77页 |
| ·讨论 | 第77-79页 |
| 第八章 综合与讨论 | 第79-83页 |
| ·BmSHMT基因的生物信息学分析及表达特征 | 第79-80页 |
| ·家蚕BmSHMT基因的全长克隆、原核表达纯化及多抗制备 | 第80页 |
| ·BmSHMT的Western blot验证和亚细胞定位 | 第80页 |
| ·家蚕BmSHMT的酶活检测 | 第80页 |
| ·家蚕BmSHMT的定点突变及酶活测定 | 第80-83页 |
| 参考文献 | 第83-93页 |
| 在读期间发表论文、申请专利与参与课题 | 第93-95页 |
| 致谢 | 第95页 |
