| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 符号及缩略说明表 | 第12-13页 |
| 第一章 综述 | 第13-29页 |
| 1 油菜菌核病及防治研究现状 | 第13-17页 |
| ·核盘菌概况 | 第13-14页 |
| ·核盘菌生活史 | 第14-15页 |
| ·油菜菌核病防治现状 | 第15-17页 |
| ·育种防治现状 | 第15页 |
| ·生物防治现状 | 第15页 |
| ·农业防治现状 | 第15-16页 |
| ·化学防治现状 | 第16-17页 |
| 2 丝状真菌效应调控因子RRG-1、RRG-2的研究概况 | 第17-19页 |
| ·丝状真菌效应调控因子RRG-1 | 第18页 |
| ·丝状真菌效应调控因子RRG-2 | 第18-19页 |
| 3 苯吡咯类杀菌剂研究概况 | 第19-20页 |
| 4 本研究的目的和意义 | 第20-22页 |
| 参考文献 | 第22-29页 |
| 第二章 核盘菌原生质体制备与遗传转化体系的优化 | 第29-45页 |
| 摘要 | 第29-30页 |
| 1 材料与方法 | 第30-34页 |
| ·菌株、质粒、培养基与试剂 | 第30页 |
| ·转化片段 | 第30-31页 |
| ·原生质体制备条件的优化 | 第31-33页 |
| ·菌丝培养条件的筛选 | 第31-32页 |
| ·菌丝培养时间的优化 | 第32页 |
| ·不同裂解酶组合的优化 | 第32页 |
| ·裂解酶浓度的优化 | 第32页 |
| ·酶解缓冲液的优化 | 第32页 |
| ·酶解时间的优化 | 第32-33页 |
| ·酶解温度的优化 | 第33页 |
| ·收集原生质体离心转速的优化 | 第33页 |
| ·再生培养条件的优化 | 第33-34页 |
| ·再生培养基(RM)的优化 | 第33-34页 |
| ·覆盖培养基(SRM)的优化 | 第34页 |
| ·PCR分析验证 | 第34页 |
| 2 结果与分析 | 第34-39页 |
| ·原生质体制备条件的优化 | 第34-38页 |
| ·菌丝培养条件的筛选 | 第34-35页 |
| ·菌丝培养时间的优化 | 第35页 |
| ·不同酶组合的优化 | 第35页 |
| ·裂解酶浓度的优化 | 第35-36页 |
| ·酶解缓冲液的优化 | 第36页 |
| ·酶解时间的优化 | 第36-37页 |
| ·酶解温度的优化 | 第37页 |
| ·离心收集原生质体转速的优化 | 第37-38页 |
| ·再生培养条件的优化 | 第38-39页 |
| ·再生培养基(RM)的优化 | 第38页 |
| ·覆盖培养基(SRM)的优化 | 第38-39页 |
| 3 讨论 | 第39-41页 |
| 参考文献 | 第41-43页 |
| ABSTRACT | 第43-45页 |
| 第三章 核盘菌效应调控因子SsRRG-1的生物学功能分析 | 第45-87页 |
| 摘要 | 第45-46页 |
| 1 材料和方法 | 第46-64页 |
| ·供试菌株、质粒、杀菌剂与培养基 | 第46页 |
| ·供试试剂 | 第46页 |
| ·核盘菌效应调控因子SsRRG-1的鉴定及序列分析 | 第46-48页 |
| ·核盘菌SsRRG-1基因敲除载体的构建 | 第48-50页 |
| ·原生质体的制备与遗传转化 | 第50-51页 |
| ·核盘菌原生质体的制备 | 第50-51页 |
| ·原生质体的转化 | 第51页 |
| ·转化子的验证 | 第51-58页 |
| ·潮霉素药剂验证 | 第51页 |
| ·PCR验证 | 第51-53页 |
| ·Southern杂交验证 | 第53-58页 |
| ·敲除突变体的互补验证 | 第58页 |
| ·表型分析 | 第58-62页 |
| ·对咯菌腈的敏感性测定 | 第58-59页 |
| ·菌丝生长速率测定、产菌核情况及菌丝显微形态观察 | 第59页 |
| ·对氧化压、渗透压、离子胁迫的敏感性测定 | 第59-60页 |
| ·对细胞壁抑制剂的敏感性测定 | 第60页 |
| ·菌丝电导率测定 | 第60页 |
| ·菌丝胞内甘油合成测定 | 第60-61页 |
| ·致病力测定 | 第61页 |
| ·侵染垫形成试验 | 第61页 |
| ·草酸合成测定 | 第61-62页 |
| ·SsRRG-1基因敲除对上下游基因表达的影响 | 第62-64页 |
| ·菌丝样品的制备 | 第62页 |
| ·样品RNA的提取 | 第62-63页 |
| ·荧光定量实时PCR | 第63-64页 |
| 2 结果与分析 | 第64-82页 |
| ·核盘菌SsRRG-1基因的鉴定及序列分析 | 第64-70页 |
| ·载体构建 | 第70-71页 |
| ·转化子验证 | 第71-74页 |
| ·敲除突变体表型分析 | 第74-77页 |
| ·对咯菌腈敏感性测定 | 第74-75页 |
| ·菌丝生长速率测定、产菌核情况及菌丝显微形态观察 | 第75-76页 |
| ·测定ΔSsRRG-1敲除突变体对渗透压、氧化压、离子胁迫的敏感性 | 第76-77页 |
| ·细胞膜透性测定 | 第77页 |
| ·胞内甘油含量测定 | 第77-79页 |
| ·细胞壁抑制剂敏感性测定 | 第79页 |
| ·致病力测定 | 第79-80页 |
| ·SsRRG-1基因敲除后对其上下游基因表达的影响 | 第80-82页 |
| 3 讨论 | 第82-84页 |
| 参考文献 | 第84-85页 |
| ABSTRACT | 第85-87页 |
| 第四章 核盘菌效应调控因子SsRRG-2的基因功能分析 | 第87-117页 |
| 摘要 | 第87-88页 |
| 1 材料和方法 | 第88-94页 |
| ·供试菌株、质粒、杀菌剂与培养基 | 第88页 |
| ·供试试剂 | 第88-89页 |
| ·核盘菌RRG-2基因的鉴定及序列分析 | 第89页 |
| ·核盘菌RRG-2基因敲除载体的构建 | 第89-91页 |
| ·原生质体的制备与遗传转化 | 第91页 |
| ·转化子的验证 | 第91-92页 |
| ·潮霉素药剂验证 | 第91页 |
| ·PCR验证 | 第91页 |
| ·Southern杂交验证 | 第91-92页 |
| ·敲除突变体的互补验证 | 第92-93页 |
| ·表型分析 | 第93页 |
| ·SsRRG-2基因敲除对上下游基因表达的影响 | 第93-94页 |
| 2 结果与分析 | 第94-110页 |
| ·核盘菌SsRRG-2基因的鉴定及序列分析 | 第94-99页 |
| ·核盘菌SsRRG-2基因敲除载体的构建 | 第99-100页 |
| ·转化子验证 | 第100-102页 |
| ·敲除突变体表型分析 | 第102-106页 |
| ·对杀菌剂敏感性测定 | 第103页 |
| ·菌丝生长速率测定、产菌核情况及菌丝显微形态观察 | 第103-105页 |
| ·测定ΔSsRRG-2敲除突变体对渗透压、氧化压、离子胁迫的敏感性 | 第105-106页 |
| ·细胞膜透性测定 | 第106-107页 |
| ·胞内甘油含量测定 | 第107-108页 |
| ·细胞膜、细胞壁抑制剂敏感性测定 | 第108页 |
| ·致病力 | 第108-109页 |
| ·SsRRG-2基因敲除后对其上下游基因表达的影响 | 第109-110页 |
| 3 讨论 | 第110-113页 |
| 参考文献 | 第113-115页 |
| ABSTRACT | 第115-117页 |
| 全文小结 | 第117-119页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文及专利 | 第119-121页 |
| 致谢 | 第121-122页 |
