| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-9页 |
| 1 引言 | 第9-15页 |
| ·嗜热微生物及嗜热酶的研究进展 | 第9-11页 |
| ·嗜热微生物 | 第9-10页 |
| ·嗜热酶 | 第10-11页 |
| ·纤维素酶的研究进展 | 第11-13页 |
| ·纤维素概述 | 第11-12页 |
| ·糖苷水解酶概述 | 第12页 |
| ·纤维素酶概述 | 第12页 |
| ·纤维素酶应用 | 第12-13页 |
| ·蛋白质工程概述 | 第13页 |
| ·费氏新萨托菌Neosartorya fischeri P1 | 第13-14页 |
| ·研究目的与意义 | 第14-15页 |
| 2 N.fischeri P1纤维素酶及半纤维素酶基因的克隆表达及性质测定 | 第15-38页 |
| ·实验材料 | 第15-16页 |
| ·菌株、质粒 | 第15页 |
| ·购买的仪器、主要试剂及试剂盒 | 第15页 |
| ·实验室配制的培养基及主要试剂 | 第15-16页 |
| ·引物的合成与测序 | 第16页 |
| ·实验方法 | 第16-26页 |
| ·对费氏新萨托菌N.fischeri P1产酶能力的验证 | 第16-17页 |
| ·N.fischeri P1总RNA及其基因组的提取 | 第17-18页 |
| ·纤维素酶或半纤维素酶酶活力的测定 | 第18页 |
| ·GH7及GH12家族纤维素及半纤维素基因的克隆 | 第18-20页 |
| ·真核表达载体pPIC9-Cel7A/pPIC9-Egl12A/pPIC9-Xyg12A的构建 | 第20-22页 |
| ·Cel7A、Egl12A及Xyg12A在毕赤酵母中的表达和纯化 | 第22-24页 |
| ·重组纤维素酶及半纤维素酶的酶学性质分析 | 第24-26页 |
| ·结果与分析 | 第26-36页 |
| ·Cel7A、Egl12A及Xyg12A的克隆及序列分析 | 第26-30页 |
| ·Cel7A、Egl12A及Xyg12A的异源表达和纯化 | 第30-31页 |
| ·Cel7A、Egl12A及Xyg12A的底物特异性和动力学参数 | 第31-32页 |
| ·Cel7A、Egl12A及Xyg12A的酶学性质 | 第32-35页 |
| ·Cel7A对大麦葡聚糖和CMC-a的终产物分析 | 第35-36页 |
| ·Cel7A的啤酒应用试验 | 第36页 |
| ·讨论 | 第36-37页 |
| 本章小结 | 第37-38页 |
| 3 N.fischeri P1来源的egl5A的克隆表达及酶学性质的研究 | 第38-56页 |
| ·实验材料 | 第38页 |
| ·菌株、质粒 | 第38页 |
| ·购买的仪器、主要试剂及试剂盒 | 第38页 |
| ·实验室配制的培养基及主要试剂 | 第38页 |
| ·引物的合成与测序 | 第38页 |
| ·实验方法 | 第38-41页 |
| ·N.fischeri P1产酶能力的验证 | 第38页 |
| ·N.fischeri P1总RNA及其基因组的提取 | 第38页 |
| ·纤维素酶酶酶活力的测定 | 第38页 |
| ·GH5家族的内切葡聚糖酶基因egl5A的克隆 | 第38页 |
| ·真核表达载体pPIC9-egl5A的构建 | 第38页 |
| ·egl5A在毕赤酵母中的表达和纯化 | 第38-39页 |
| ·重组纤维素酶的酶学性质分析 | 第39页 |
| ·egl5A四个单点突变体Q177E、Q261E、Q288E及Q333E的构建 | 第39-40页 |
| ·egl5A四个单点突变体真核表达载体的构建 | 第40页 |
| ·egl5A四个单点突变体在毕赤酵母中的表达和纯化 | 第40-41页 |
| ·Egl5A四个突变体酶学性质分析 | 第41页 |
| ·结果与分析 | 第41-54页 |
| ·GH5家族的内切葡聚糖酶基因egl5A克隆及序列分析 | 第41-42页 |
| ·Egl5A异源表达和纯化 | 第42-43页 |
| ·Egl5A的酶学性质 | 第43-45页 |
| ·Egl5A的底物特异性和动力学参数 | 第45-46页 |
| ·Egl5A的终产物分析 | 第46-47页 |
| ·Egl5A的滤纸降解实验 | 第47页 |
| ·Egl5A的四个单点突变体的克隆与序列分析 | 第47-52页 |
| ·Egl5A的四个单点突变体的异源表达和纯化 | 第52页 |
| ·Egl5A的四个单点突变体的酶学性质分析 | 第52-53页 |
| ·Egl5A的四个单点突变体的动力学参数及比活 | 第53-54页 |
| ·Egl5A及其四个单点突变体胃蛋白酶抗性实验 | 第54页 |
| ·讨论 | 第54-55页 |
| 本章小结 | 第55-56页 |
| 4 全文结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-60页 |
| 个人简介 | 第60-61页 |
| 导师简介 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
