| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 第一章 绪论 | 第9-16页 |
| ·概述 | 第9-11页 |
| ·延胡索酸及其应用 | 第9页 |
| ·延胡索酸的生产工艺 | 第9-11页 |
| ·酿酒酵母作为细胞工厂生产延胡索酸 | 第11-12页 |
| ·酿酒酵母生产延胡索酸的优势 | 第11页 |
| ·酿酒酵母生产延胡索酸存在的问题 | 第11-12页 |
| ·丙酮酸羧化酶性质及研究 | 第12-13页 |
| ·丙酮酸羧化酶性质 | 第12页 |
| ·丙酮酸羧化酶在代谢中的作用 | 第12-13页 |
| ·丙酮酸羧化酶在酿酒酵母生产延胡索酸中的作用 | 第13页 |
| ·立项依据 | 第13-15页 |
| ·国内外的研究现状 | 第13-14页 |
| ·本课题的研究意义 | 第14-15页 |
| ·研究内容 | 第15-16页 |
| 第二章 材料与方法 | 第16-27页 |
| ·菌株和质粒 | 第16页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第16-17页 |
| ·试剂 | 第16页 |
| ·实验主要溶液配制 | 第16-17页 |
| ·仪器设备 | 第17页 |
| ·培养条件 | 第17-18页 |
| ·培养基 | 第17-18页 |
| ·培养方法 | 第18页 |
| ·分析方法 | 第18-19页 |
| ·生物量测定 | 第18页 |
| ·HPLC分析 | 第18-19页 |
| ·酶活分析 | 第19页 |
| ·基因操作方法 | 第19-27页 |
| ·DNA操作方法 | 第19页 |
| ·酵母转化（敲除盒） | 第19-20页 |
| ·酵母转化（质粒） | 第20页 |
| ·玻璃珠法提取酿酒酵母基因组DNA | 第20页 |
| ·碱裂解法提取质粒 | 第20-21页 |
| ·大肠转化 | 第21页 |
| ·细胞中总蛋白的提取 | 第21页 |
| ·Western Blot | 第21-22页 |
| ·PDC1、ADH1、FUM1 基因敲除 | 第22-24页 |
| ·分子克隆策略 | 第24-25页 |
| ·RoPYC定位研究 | 第25页 |
| ·RoPYC定点突变 | 第25-27页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第27-43页 |
| ·减少通往乙醇的碳代谢流 | 第27-32页 |
| ·PDC1 基因敲除 | 第28页 |
| ·PDC1 和ADH1 双基因敲除 | 第28-29页 |
| ·PDC1 和ADH1 双基因缺失对菌体生长及耗糖的影响 | 第29页 |
| ·PDC1 和ADH1 基因缺失对PDC和ADH酶活的影响 | 第29-30页 |
| ·发酵优化提高菌体生物量 | 第30-31页 |
| ·pdc1adh1 基因缺失株发酵性能研究 | 第31-32页 |
| ·构建延胡索酸的合成途径 | 第32-34页 |
| ·fum1 单基因缺失株的构建 | 第32-33页 |
| ·pdc1adh1fum1 缺失株的构建 | 第33页 |
| ·FUM1 基因敲除对延胡索酸代谢的影响 | 第33-34页 |
| ·丙酮酸羧化酶在延胡索酸积累中的作用 | 第34-43页 |
| ·丙酮酸羧化酶RoPYC在酿酒酵母中的定位研究 | 第34-36页 |
| ·丙酮酸羧化酶的克隆表达及辅因子优化 | 第36-39页 |
| ·丙酮酸羧化酶的定点突变 | 第39-43页 |
| 主要结论与展望 | 第43-45页 |
| 致谢 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-50页 |
| 附录: 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第50页 |