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丙酮酸羧化酶调控酿酒酵母合成延胡索酸的作用研究

摘要第1-5页
Abstract第5-9页
第一章 绪论第9-16页
   ·概述第9-11页
     ·延胡索酸及其应用第9页
     ·延胡索酸的生产工艺第9-11页
   ·酿酒酵母作为细胞工厂生产延胡索酸第11-12页
     ·酿酒酵母生产延胡索酸的优势第11页
     ·酿酒酵母生产延胡索酸存在的问题第11-12页
   ·丙酮酸羧化酶性质及研究第12-13页
     ·丙酮酸羧化酶性质第12页
     ·丙酮酸羧化酶在代谢中的作用第12-13页
     ·丙酮酸羧化酶在酿酒酵母生产延胡索酸中的作用第13页
   ·立项依据第13-15页
     ·国内外的研究现状第13-14页
     ·本课题的研究意义第14-15页
   ·研究内容第15-16页
第二章 材料与方法第16-27页
   ·菌株和质粒第16页
   ·主要试剂和仪器第16-17页
     ·试剂第16页
     ·实验主要溶液配制第16-17页
     ·仪器设备第17页
   ·培养条件第17-18页
     ·培养基第17-18页
     ·培养方法第18页
   ·分析方法第18-19页
     ·生物量测定第18页
     ·HPLC分析第18-19页
     ·酶活分析第19页
   ·基因操作方法第19-27页
     ·DNA操作方法第19页
     ·酵母转化(敲除盒)第19-20页
     ·酵母转化(质粒)第20页
     ·玻璃珠法提取酿酒酵母基因组DNA第20页
     ·碱裂解法提取质粒第20-21页
     ·大肠转化第21页
     ·细胞中总蛋白的提取第21页
     ·Western Blot第21-22页
     ·PDC1、ADH1、FUM1 基因敲除第22-24页
     ·分子克隆策略第24-25页
     ·RoPYC定位研究第25页
     ·RoPYC定点突变第25-27页
第三章 结果与讨论第27-43页
   ·减少通往乙醇的碳代谢流第27-32页
     ·PDC1 基因敲除第28页
     ·PDC1 和ADH1 双基因敲除第28-29页
     ·PDC1 和ADH1 双基因缺失对菌体生长及耗糖的影响第29页
     ·PDC1 和ADH1 基因缺失对PDC和ADH酶活的影响第29-30页
     ·发酵优化提高菌体生物量第30-31页
     ·pdc1adh1 基因缺失株发酵性能研究第31-32页
   ·构建延胡索酸的合成途径第32-34页
     ·fum1 单基因缺失株的构建第32-33页
     ·pdc1adh1fum1 缺失株的构建第33页
     ·FUM1 基因敲除对延胡索酸代谢的影响第33-34页
   ·丙酮酸羧化酶在延胡索酸积累中的作用第34-43页
     ·丙酮酸羧化酶RoPYC在酿酒酵母中的定位研究第34-36页
     ·丙酮酸羧化酶的克隆表达及辅因子优化第36-39页
     ·丙酮酸羧化酶的定点突变第39-43页
主要结论与展望第43-45页
致谢第45-46页
参考文献第46-50页
附录: 作者在攻读硕士学位期间发表的论文第50页

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