| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-13页 |
| 1 文献综述 | 第13-26页 |
| ·CGMMV的研究进展 | 第13-18页 |
| ·命名与分类 | 第13-14页 |
| ·生物学特性 | 第14-18页 |
| ·病毒分布与危害 | 第14-15页 |
| ·CGMMV寄主与症状 | 第15-17页 |
| ·自然寄主与症状 | 第15-16页 |
| ·人工接种寄主与症状 | 第16-17页 |
| ·传播方式 | 第17-18页 |
| ·种子传播 | 第17页 |
| ·接触传播 | 第17页 |
| ·其他 | 第17-18页 |
| ·基因组结构与功能 | 第18页 |
| ·CGMMV的检测 | 第18-22页 |
| ·生物学检测 | 第19页 |
| ·血清学检测 | 第19-21页 |
| ·电子显微镜观察法 | 第21页 |
| ·分子生物学检测 | 第21-22页 |
| ·CGMMV的防治 | 第22-25页 |
| ·加强检疫力度 | 第22-23页 |
| ·种子处理 | 第23页 |
| ·选育抗病品种 | 第23页 |
| ·生物防治 | 第23-24页 |
| ·农业防治 | 第24页 |
| ·化学防治 | 第24-25页 |
| ·人工miRNA | 第25页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第25-26页 |
| 2 CGMMV基因组全序列分析 | 第26-45页 |
| ·实验材料 | 第26-27页 |
| ·供试毒源 | 第26页 |
| ·菌株与载体 | 第26-27页 |
| ·试剂 | 第27页 |
| ·仪器设备 | 第27页 |
| ·实验方法 | 第27-37页 |
| ·症状观察 | 第27-28页 |
| ·电子显微镜观察 | 第28页 |
| ·生物学方法 | 第28页 |
| ·分子生物学检测 | 第28-31页 |
| ·总RNA提取(Trizol法) | 第28-29页 |
| ·逆转录 | 第29-30页 |
| ·引物设计 | 第30-31页 |
| ·目的片段扩增 | 第31页 |
| ·CGMMV全序列的扩增 | 第31-32页 |
| ·CGMMV 5’-末端和3’-末端序列的扩增(RACE法) | 第32-34页 |
| ·目的片段切胶纯化 | 第34页 |
| ·连接 | 第34-35页 |
| ·转化和筛选 | 第35页 |
| ·质粒提取 | 第35-36页 |
| ·测序及分析 | 第36-37页 |
| ·结果与分析 | 第37-43页 |
| ·CGMMV的检测鉴定 | 第37-39页 |
| ·CGMMV分离物基因组结构分析 | 第39-41页 |
| ·全序列同源性及系统进化树分析 | 第41-43页 |
| ·讨论 | 第43-45页 |
| 3 浙江省和上海市葫芦科病毒病调查 | 第45-62页 |
| ·实验材料 | 第45-49页 |
| ·菌株与载体 | 第45-46页 |
| ·试剂 | 第46页 |
| ·样品采集方法 | 第46页 |
| ·调查点的选择 | 第46页 |
| ·普查方法 | 第46页 |
| ·样品采集信息 | 第46-49页 |
| ·样品采集时间、地点及寄主 | 第46-48页 |
| ·统计样品采集数量 | 第48-49页 |
| ·实验方法 | 第49-55页 |
| ·CGMMV抗血清的制备 | 第49-54页 |
| ·CGMMV CP原核表达载体构建 | 第49-51页 |
| ·GMMV CP基因在大肠杆菌中的诱导表达及检测 | 第51页 |
| ·GMMV CP蛋白的大量表达 | 第51-52页 |
| ·CGMMV CP包涵体蛋白的纯化 | 第52-53页 |
| ·BugBuster Master Mix裂解 | 第52页 |
| ·包涵体的纯化 | 第52-53页 |
| ·目的蛋白纯化 | 第53页 |
| ·制备抗血清 | 第53页 |
| ·Western blot检测 | 第53-54页 |
| ·Dot-ELISA检测 | 第54-55页 |
| ·结果与分析 | 第55-60页 |
| ·CGMMV CP基因的原核表达和Western blot检测 | 第55-57页 |
| ·CGMMV CP抗血清对葫芦科不同组织检测结果 | 第57页 |
| ·浙江省CGMMV发病情况 | 第57-59页 |
| ·上海市CGMMV发病情况 | 第59-60页 |
| ·讨论 | 第60-62页 |
| 4 利用amiRNA防控CGMMV的初步研究 | 第62-73页 |
| ·实验材料 | 第62-64页 |
| ·植物材料 | 第62页 |
| ·菌株与载体 | 第62-63页 |
| ·试剂 | 第63-64页 |
| ·仪器 | 第64页 |
| ·实验方法 | 第64-69页 |
| ·构建针对CGMMV的人工miRNA | 第64-65页 |
| ·amiRNA的预测 | 第64页 |
| ·引物设计 | 第64-65页 |
| ·构建载体 | 第65页 |
| ·农杆菌浸润法介导CGMMV的amiRNA防控应用 | 第65-67页 |
| ·农杆菌EHA105感受态细胞的制备 | 第65页 |
| ·农杆菌转化及阳性克隆检测 | 第65-66页 |
| ·收集菌体并浸润烟草 | 第66页 |
| ·摩擦接种烟草并进行症状观察 | 第66-67页 |
| ·Northern blot检测 | 第67-69页 |
| ·结果与分析 | 第69-72页 |
| ·amiRNA抑制烟草花叶病毒的侵染 | 第69-70页 |
| ·amiR-CGMMV抑制黄瓜绿斑驳花叶病毒的侵染 | 第70-72页 |
| ·讨论 | 第72-73页 |
| 5 小结与下一步工作计划 | 第73-74页 |
| ·小结 | 第73页 |
| ·下一步工作计划 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-80页 |
| 附录 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81-83页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第83-85页 |
