| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 第1章 引言 | 第9-38页 |
| ·斑马鱼的发育过程及作为模式生物的优点 | 第9-11页 |
| ·斑马鱼的发育过程简介 | 第9-11页 |
| ·斑马鱼作为模式生物的优点 | 第11页 |
| ·斑马鱼的常规研究方法 | 第11-14页 |
| ·斑马鱼基因表达的研究 | 第11-12页 |
| ·斑马鱼基因功能的研究之正向遗传技术 | 第12-13页 |
| ·斑马鱼基因功能的研究之反向遗传技术 | 第13-14页 |
| ·斑马鱼基因敲除技术 | 第14-18页 |
| ·TALENs定点敲除技术 | 第14-17页 |
| ·CRISPR-Cas9定点敲除技术 | 第17-18页 |
| ·斑马鱼的侧线系统发育 | 第18-30页 |
| ·斑马鱼侧线系统的基本结构和功能 | 第19-21页 |
| ·斑马鱼侧线系统的发育 | 第21-23页 |
| ·后部侧线原基的图式形成 | 第23-25页 |
| ·后部侧线原基选择性迁移的调控 | 第25-26页 |
| ·后部侧线原基细胞形态的调控 | 第26-28页 |
| ·后部侧线原基中原神经丘堆积过程的调控 | 第28-30页 |
| ·侧线系统的研究意义 | 第30页 |
| ·TGF-β 信号通路 | 第30-37页 |
| ·TGF-β 亚家族信号通路简介 | 第31-34页 |
| ·TGF-β 信号通路功能 | 第34-37页 |
| ·本课题的研究目的和意义 | 第37-38页 |
| 第2章 材料与方法 | 第38-56页 |
| ·斑马鱼品系及培养条件 | 第38页 |
| ·质粒的构建 | 第38-40页 |
| ·mRNA和探针的合成 | 第40-41页 |
| ·显微注射 | 第41-42页 |
| ·反义寡核苷酸（MO）的设计和使用 | 第42-43页 |
| ·斑马鱼胚胎总RNA提取和半定量PCR | 第43-44页 |
| ·整胚原位杂交 | 第44-47页 |
| ·整胚免疫荧光 | 第47-48页 |
| ·BrdU标记细胞增殖 | 第48-49页 |
| ·TUNEL染色标记细胞凋亡 | 第49页 |
| ·Time-lapse实时细胞摄影 | 第49-50页 |
| ·材料准备和斑马鱼胚胎的包埋 | 第49-50页 |
| ·双光子仪器拍摄及图像处理 | 第50页 |
| ·侧线系统毛细胞的染色 | 第50-51页 |
| ·FM& | 第50页 |
| ·毛细胞染色及拍照 | 第50-51页 |
| ·细胞移植实验 | 第51-52页 |
| ·使用TALENs技术构建斑马鱼tgfβ1a突变体 | 第52-56页 |
| ·TALENs靶位点的选择 | 第52页 |
| ·TALENs相关质粒的构建 | 第52-55页 |
| ·斑马鱼注射和靶位点有效性的检测 | 第55页 |
| ·突变体的鉴定 | 第55-56页 |
| 第3章 结果与讨论 | 第56-92页 |
| ·斑马鱼tgfβ1a基因在侧线系统特异表达 | 第56-57页 |
| ·抑制tgfβ1a引起斑马鱼后部侧线系统发育异常 | 第57-61页 |
| ·斑马鱼tgfβ1a-MO的设计及有效性检测 | 第57-58页 |
| ·敲低tgfβ1a导致后部侧线形成神经丘数目减少和间距增加 | 第58-61页 |
| ·小结 | 第61页 |
| ·抑制tgfβ1a导致后部侧线原基行为异常 | 第61-63页 |
| ·抑制tgfβ1a导致后部侧线原基迁移变慢 | 第61-62页 |
| ·敲低tgfβ1a抑制后部侧线原基堆积神经丘 | 第62-63页 |
| ·小结 | 第63页 |
| ·tgfβ1a可能通过调控cdh2影响侧线原基细胞粘结力 | 第63-68页 |
| ·抑制tgfβ1a并不影响侧线系统化学趋化因子的表达 | 第64-65页 |
| ·抑制tgfβ1a特异下调后部侧线原基中cdh2的表达 | 第65-66页 |
| ·抑制cdh2可以模拟tgfβ1a下调导致的侧线异常 | 第66-67页 |
| ·小结 | 第67-68页 |
| ·tgfβ1a可能通过调控deltaA影响前神经丘的成熟及堆积 | 第68-71页 |
| ·抑制tgfβ1a并不影响侧线原基的图式形成 | 第68-69页 |
| ·tgfβ1a特异调控侧线原基中deltaA的表达 | 第69-71页 |
| ·小结 | 第71页 |
| ·Tgfβ1a在侧线系统的功能依赖于Smad5 | 第71-76页 |
| ·过表达casmad5可以很好的恢复敲低tgfβ1a导致的侧线系统缺陷 | 第71-74页 |
| ·抑制smad5会引起侧线系统异常 | 第74-75页 |
| ·小结 | 第75-76页 |
| ·移植野生型细胞可以部分挽救敲低tgfβ1a导致的神经丘减少 | 第76-77页 |
| ·tgfβ1a突变体侧线系统发育异常 | 第77-89页 |
| ·采用TALENs技术成功构建tgfβ1a突变体 | 第77-81页 |
| ·tgfβ1a突变体存在侧线异常且可以被过表达tgfβ1a或casmad5挽救 | 第81-84页 |
| ·tgfβ1a突变体后部侧线原基中cdh2和deltaA等因子表达下调 | 第84-86页 |
| ·细胞增殖或凋亡并不是侧线系统中神经丘数目减少的原因 | 第86-88页 |
| ·小结 | 第88-89页 |
| ·本章结论 | 第89-92页 |
| 第4章 讨论与展望 | 第92-98页 |
| ·本研究主要成果 | 第92页 |
| ·斑马鱼tgfβ1a在胚胎发育早期并不影响侧线系统发育 | 第92-93页 |
| ·后部侧线原基中cdh2在侧线系统的功能研究 | 第93-95页 |
| ·在斑马鱼侧线系统中Tgfβ1a的信号转导途径 | 第95-96页 |
| ·斑马鱼Tgfβ1a调控侧线系统发育过程的意义 | 第96-98页 |
| 参考文献 | 第98-112页 |
| 致谢 | 第112-114页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文及研究成果 | 第114页 |
