| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 1 前言 | 第10-18页 |
| ·香蕉枯萎病及尖孢镰刀菌研究概况 | 第10-13页 |
| ·真菌遗传转化研究方法 | 第13-14页 |
| ·MAPK信号传导途径 | 第14-16页 |
| ·mps1基因的研究背景 | 第16-17页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第17-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-52页 |
| ·材料、试剂和仪器 | 第18-21页 |
| ·材料 | 第18页 |
| ·主要试剂 | 第18页 |
| ·主要仪器 | 第18-19页 |
| ·主要培养基及试剂配方 | 第19-21页 |
| ·实验方法 | 第21-52页 |
| ·致病基因的筛选及生物信息学分析 | 第21页 |
| ·Fomps1基因的PCR和RT-PCR扩增 | 第21-23页 |
| ·Fomps1基因同源臂的克隆 | 第23-28页 |
| ·Fomps1基因敲除载体的构建 | 第28-34页 |
| ·香蕉枯萎病菌原生质体转化 | 第34-35页 |
| ·转化子的鉴定 | 第35-37页 |
| ·Fomps1基因缺失突变体菌株的表型观察 | 第37-43页 |
| ·Fomps1基因突变体的致病力测定 | 第43-44页 |
| ·香蕉苗根部侵染试验 | 第44页 |
| ·Fomps1基因缺失突变体粗毒素测定试验 | 第44-45页 |
| ·Fomps1基因缺失突变体与芽孢拮抗试验 | 第45-46页 |
| ·Fomps1基因缺失突变体对农药的抗药性试验 | 第46页 |
| ·Fomps1基因缺失突变体中致病相关因子转录水平检测 | 第46-47页 |
| ·Fomps1基因功能回复验证 | 第47-52页 |
| 3 结果与分析 | 第52-81页 |
| ·目的基因的生物信息学分析 | 第52-54页 |
| ·目的基因的PCR和RT-PCR扩增 | 第54页 |
| ·同源臂的PCR扩增 | 第54页 |
| ·同源臂的PCR克隆 | 第54-55页 |
| ·FOC4-Fomps1-A-pCT74重组质粒的酶切鉴定 | 第55页 |
| ·FOC4-Fomps1-A-pCT74-B重组质粒的酶切鉴定 | 第55-56页 |
| ·Foc4原生质体的制备 | 第56-57页 |
| ·转化子的分离纯化及鉴定 | 第57-60页 |
| ·转化子的分离纯化 | 第57页 |
| ·转化子的PCR检测 | 第57-59页 |
| ·RT-PCR检测 | 第59-60页 |
| ·Fomps1基因突变体菌株的表型观察 | 第60-70页 |
| ·突变体菌落形态观察 | 第60-61页 |
| ·生长速率和产孢量测定 | 第61页 |
| ·突变体菌丝和孢子形态观察 | 第61-62页 |
| ·突变体异核体的观察 | 第62-63页 |
| ·突变体疏水性试验 | 第63页 |
| ·纤维素酶活力平板测定试验 | 第63-64页 |
| ·漆酶活力平板测定试验 | 第64页 |
| ·木质素过氧化物酶活力平板测定试验 | 第64-65页 |
| ·纤维素酶活力测定 | 第65-66页 |
| ·果胶酶活力测定测定 | 第66-67页 |
| ·过氧化氢压力筛选试验 | 第67页 |
| ·玻璃纸试验 | 第67-68页 |
| ·不同碳源中突变体的生长情况比较 | 第68-69页 |
| ·Fomps1基因缺失突变体对渗透压变化敏感性试验 | 第69-70页 |
| ·Fomps1基因突变体的致病力测定 | 第70-72页 |
| ·香蕉离体叶片的致病性测定 | 第70页 |
| ·香蕉假茎的致病性试验 | 第70-71页 |
| ·香蕉苗水培致病性试验 | 第71-72页 |
| ·盆栽致病性试验 | 第72页 |
| ·香蕉苗根部侵染试验 | 第72-73页 |
| ·Fomps1基因缺失突变体粗毒素测定试验 | 第73-76页 |
| ·粗毒素提取液对香蕉苗毒力测定试验 | 第73页 |
| ·粗毒素提取液对种子胚根的抑制率试验 | 第73-75页 |
| ·Fomps1基因缺失突变体粗毒素高效液相色谱分析 | 第75-76页 |
| ·Fomps1基因缺失突变体与芽孢拮抗试验 | 第76页 |
| ·Fomps1基因缺失突变体对农药的抗药性试验 | 第76-77页 |
| ·Fomps1基因缺失突变体中致病相关因子转录水平检测 | 第77页 |
| ·互补载体的构建 | 第77-79页 |
| ·互补片段的PCR扩增 | 第77-78页 |
| ·Re-Fomps1-T重组质粒的酶切鉴定 | 第78-79页 |
| ·互补载体酶切验证 | 第79页 |
| ·互补转化子的鉴定 | 第79页 |
| ·互补转化子的功能回复验证 | 第79-81页 |
| 4 讨论 | 第81-87页 |
| ·Fomps1基因敲除载体的构建 | 第81页 |
| ·原生质体的制备及转化 | 第81页 |
| ·Fomps1转化子的鉴定 | 第81-82页 |
| ·Fomps1基因缺失对香蕉枯萎病菌表型的影响 | 第82-83页 |
| ·Fomps1基因缺失对酶活的影响 | 第83-84页 |
| ·Fomps1基因缺失对香蕉致病力的影响 | 第84-85页 |
| ·Fomps1基因缺失对粗毒素的影响 | 第85页 |
| ·Fomps1基因缺失突变体的抗性试验 | 第85-86页 |
| ·Fomps1基因缺失突变体中致病相关因子的转录水平检测 | 第86页 |
| ·Fomps1基因缺失突变体的互补实验 | 第86-87页 |
| 5 结论 | 第87-88页 |
| 6 参考文献 | 第88-96页 |
| 附录 | 第96-98页 |
| 致谢 | 第98页 |
