| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 缩略词表 | 第12-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-19页 |
| 第二章 溶瘤腺病毒 SG655-SGM 及其对照病毒 SG655-SF 和 SG655-GM 的构建及鉴定 | 第19-49页 |
| 一、 材料与方法 | 第19-41页 |
| （一） 实验材料 | 第19-21页 |
| 1、 实验所需质粒、感受态和细胞株 | 第19页 |
| 2、 引物合成 | 第19页 |
| 3、 实验所需试剂的配制 | 第19-21页 |
| （二） 实验方法 | 第21-41页 |
| 1、 p74-Tp-SGM 质粒的构建 | 第21-25页 |
| 2、 p74-Tp-SF 质粒的构建 | 第25-31页 |
| 3、 p74-Tp-GM 质粒的构建 | 第31-35页 |
| 4、 质粒 p74-TP-SGM、p74-TP-SF、p74-TP-GM 的大量提取 | 第35-36页 |
| 5、 溶瘤腺病毒 SG655-SGM、SG655-SF、SG655-GM 的包装和鉴定 | 第36-39页 |
| 6、 病毒的大量扩增、纯化和滴度测定 | 第39-41页 |
| 二、 实验结果 | 第41-48页 |
| （一） 质粒构建 | 第41-46页 |
| 1、 SGM、SF、GM 结构模式图 | 第41页 |
| 2、 质粒 pCA19-SGM 的鉴定结果 | 第41-42页 |
| 3、 MCMV-SGM 基因片段的获取 | 第42页 |
| 4、 质粒 p74-TP-SGM 的酶切鉴定 | 第42-43页 |
| 5、 SF、GM 基因片段的获取 | 第43页 |
| 6、 pCA19 骨架载体获取 | 第43页 |
| 7、 质粒 pCA19-SF 的酶切鉴定 | 第43-44页 |
| 8、 质粒 pCA19-GM 的酶切鉴定 | 第44-45页 |
| 9、 MCMV-GM 和 MCMV-SF 基因片段的获取 | 第45页 |
| 10、 质粒 p74-TP-SF 酶切鉴定 | 第45-46页 |
| 11、质粒 p74-TP-GM 酶切鉴定 | 第46页 |
| （二） 溶瘤腺病毒 SG655-SGM 及其对照病毒 SG655-SF、SG655-GM的鉴定、扩增、纯化、以及滴度测定 | 第46-48页 |
| 1、 溶瘤腺病毒 SG655-SGM 的鉴定 | 第46-47页 |
| 2、 溶瘤腺病毒 SG655-SF 的鉴定 | 第47页 |
| 3、 溶瘤腺病毒 SG655-GM 的鉴定 | 第47页 |
| 4、 溶瘤腺病毒的扩增、纯化与滴度测定 | 第47-48页 |
| 三、 讨论 | 第48-49页 |
| 第三章 溶瘤腺病毒 SG655-SGM 对胆管细胞癌在体外的抗肿瘤作用研究 | 第49-59页 |
| 一、 材料与方法 | 第49-54页 |
| （一） 实验材料 | 第49-50页 |
| 1、 实验所需细胞株 | 第49页 |
| 2、 实验所需腺病毒 | 第49页 |
| 3、 主要试剂配制 | 第49-50页 |
| （二） 实验方法 | 第50-54页 |
| 1、 细胞培养 | 第50-51页 |
| 2、 溶瘤腺病毒 SG655-SGM 在 293 细胞中表达蛋白 SIRPα CV1-IgG1 | 第51-52页 |
| 3、 流式细胞仪检测胆管癌细胞 EH-CA1-Y 和 EH-CA1-T 的 CD47表达水平 | 第52-53页 |
| 4、 间接免疫荧光实验检测 SF 蛋白与 CD47 的特异性结合 | 第53页 |
| 5、 荧光显微镜观察 Ad5-eGFP 和 Ad35-eGFP 分别对胆管癌细胞EH-CA1-Y 和 EH-CA1-T 的感染效率 | 第53页 |
| 6、 溶瘤腺病毒在胆管癌细胞 EH-CA1-Y 和 EH-CA1-T 中的增殖能力实验 | 第53页 |
| 7、 MTT 实验检测溶瘤腺病毒对胆管癌细胞 EH-CA1-Y 和 EH-CA1-T细胞的杀伤作用 | 第53-54页 |
| 二、 实验结果 | 第54-57页 |
| 1、 Western Bloting 检测融合蛋白 SF 在 293 细胞中的表达 | 第54页 |
| 2、 ELISA 检测 mGM-CSF 在 293 细胞中的表达 | 第54-55页 |
| 3、 胆管癌细胞 EH-CA1-T 和 EH-CA1-Y 的 CD47 表达水平 | 第55页 |
| 4、 融合蛋白 SF 与 CD47 特异性结合 | 第55-56页 |
| 5、 Ad5-eGFP 和 Ad35-eGFP 分别对胆管癌细胞 EH-CA1-Y 和EH-CA1-T 的感染效率 | 第56页 |
| 6、 溶瘤腺病毒 SG655-SGM、SG655-SF、SG655-GM 在胆管癌细胞EH-CA1-Y 和 EH-CA1-T 中的增殖能力 | 第56-57页 |
| 7、 MTT 实验检测溶瘤腺病毒 SG655-SGM、SG655-SF、SG655-GM对胆管癌细胞 EH-CA1-Y 和 EH-CA1-T 细胞的杀伤作用 | 第57页 |
| 三、 讨论 | 第57-59页 |
| 第四章 溶瘤腺病毒 SG655-SGM 对胆管癌细胞裸鼠模型的抗肿瘤作用研究 | 第59-63页 |
| 一、 材料与方法 | 第59-61页 |
| 1. 实验材料 | 第59页 |
| 2. 实验方法 | 第59-61页 |
| 二、 实验结果 | 第61-62页 |
| 1. 裸鼠胆管癌 EH-CA1-Y 移植瘤模型的建立 | 第61页 |
| 2. 瘤内注射溶瘤腺病毒肿瘤治疗 EH-CA1-Y 移植瘤的疗效观察 | 第61-62页 |
| 三、 讨论 | 第62-63页 |
| 全文小结 | 第63-65页 |
| 综述 | 第65-69页 |
| 参考文献 | 第69-75页 |
| 在读期间发表论文和参加科研工作情况说明 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
