| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 缩略语表 | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第12-22页 |
| ·肌肉组织 | 第12页 |
| ·骨骼肌的形成 | 第12-13页 |
| ·肌肉细胞分化的转录调控 | 第13-15页 |
| ·生肌决定因子(MyoD) | 第14页 |
| ·成肌因子5(Myf5) | 第14页 |
| ·肌细胞生成素(MyoG) | 第14-15页 |
| ·成肌调节因子4(MRF4) | 第15页 |
| ·Akt激酶3(Akt3) | 第15页 |
| ·microRNAs和肌肉发生 | 第15-17页 |
| ·microRNA | 第15-16页 |
| ·肌肉组织特异性的miRNAs | 第16-17页 |
| ·非肌肉组织特异性的miRNAs | 第17页 |
| ·miR-17～92基因簇的研究进展 | 第17-21页 |
| ·microRNA-17～92基因簇 | 第17-19页 |
| ·miR-17和miR-20在癌症方面的研究 | 第19页 |
| ·miR-17和miR-20作为致癌基因的研究 | 第19页 |
| ·miR-17和miR-20作为癌症抑制基因的研究 | 第19-20页 |
| ·miR-17和miR-20在造血系统方面的研究 | 第20页 |
| ·miR-17和miR-20在心肺功能方面的研究 | 第20页 |
| ·miR-17～92基因簇在脂肪形成方面的研究 | 第20-21页 |
| ·miR-17～92基因簇在成骨方面的研究 | 第21页 |
| ·miR-106b的研究进展 | 第21页 |
| ·研究目的与意义 | 第21-22页 |
| 2 实验材料与方法 | 第22-40页 |
| ·实验材料 | 第22页 |
| ·实验细胞 | 第22页 |
| ·实验菌株 | 第22页 |
| ·实验载体 | 第22页 |
| ·实验试剂 | 第22-25页 |
| ·主要实验试剂 | 第22-23页 |
| ·主要溶液的配置 | 第23-24页 |
| ·细菌培养基的配置 | 第23页 |
| ·质粒抽提试剂 | 第23页 |
| ·琼脂糖电泳试剂配置 | 第23-24页 |
| ·细胞培养相关培养基的配置 | 第24页 |
| ·主要实验仪器 | 第24-25页 |
| ·分子生物学相关软件 | 第25页 |
| ·实验方法 | 第25-35页 |
| ·细胞基因组DNA的制备 | 第25-27页 |
| ·细胞培养无菌环境的准备 | 第25-26页 |
| ·细胞复苏 | 第26页 |
| ·细胞培养与传代 | 第26页 |
| ·细胞基因组DNA的提取 | 第26-27页 |
| ·小鼠Myf5基因3'UTR序列和Akt3基因的3'UTR序列的扩增及双荧光报告真核表达载体的构建 | 第27-28页 |
| ·DNA电泳检测PCR产物检测及回收纯化 | 第28-29页 |
| ·DNA片段的克隆与测序 | 第29-30页 |
| ·质粒的大量提取 | 第30-32页 |
| ·细胞的瞬时转染 | 第32-33页 |
| ·细胞总RNA提取、纯化和反转录 | 第33-34页 |
| ·细胞样品总RNA提取 | 第33页 |
| ·总RNA的纯化 | 第33-34页 |
| ·反转录 | 第34页 |
| ·实时定量PCR | 第34-35页 |
| ·检测引物 | 第34-35页 |
| ·实时定量PCR扩增条件 | 第35页 |
| ·双荧光素酶报告系统检测 | 第35-36页 |
| ·试剂准备 | 第36页 |
| ·细胞裂解 | 第36页 |
| ·被动裂解 | 第36页 |
| ·检测样品 | 第36页 |
| ·C2C12细胞成肌分化 | 第36-37页 |
| ·流式细胞术检测细胞周期 | 第37页 |
| ·Western blot | 第37-39页 |
| ·蛋白质的制取(以6孔板为例) | 第37页 |
| ·BCA法测定蛋白浓度 | 第37-38页 |
| ·SDS-PAGE胶(以浓度12%胶为例) | 第38页 |
| ·Western blot | 第38-39页 |
| ·数据统计分析 | 第39-40页 |
| 3 实验结果与分析 | 第40-56页 |
| ·miR-20a和miR-106b的组织表达谱 | 第40页 |
| ·miR-20a和miR-106b在C2C12细胞成肌分化过程中的表达 | 第40-43页 |
| ·C2C12细胞分化模型的建立 | 第40-41页 |
| ·C2C12成肌分化过程中标记基因的检测 | 第41-42页 |
| ·Akt3、miR-20a和miR-106b在C2C12成肌分化过程中的表达 | 第42-43页 |
| ·生物信息学分析 | 第43-44页 |
| ·双荧光素酶实验 | 第44-50页 |
| ·miR-20a对Myf5基因的调控 | 第44-46页 |
| ·miR-106b对Myf5基因的调控 | 第46-48页 |
| ·miR-106b对Akt3基因的调控 | 第48-50页 |
| ·miR-20a和miR-106b对Myf5和Akt3基因表达的调节 | 第50-52页 |
| ·C2C12细胞中超表达miR-20a和miR-106b效果检测 | 第50页 |
| ·miR-20a对Myf5基因表达的调节 | 第50-51页 |
| ·miR-106b对Akt3和Myf5基因表达的调节 | 第51-52页 |
| ·miR-20a对成肌细胞分化的调控作用 | 第52-53页 |
| ·miR-20a和miR-106b对细胞周期进程的影响 | 第53-56页 |
| ·miR-20a对细胞周期进程的影响 | 第53-55页 |
| ·miR-106b对细胞周期进程的影响 | 第55-56页 |
| 4 讨论 | 第56-58页 |
| 5 结论与创新点 | 第58-59页 |
| ·结论 | 第58页 |
| ·创新点 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
