| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 常用中英文縮略词表 | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-23页 |
| 1 前言 | 第14页 |
| 2 真核生物启动子的研究进展 | 第14-16页 |
| ·真核生物启动子的结构 | 第14-15页 |
| ·真核生物启动子的转录调控 | 第15-16页 |
| 3 启动子的预测和研究方法 | 第16-18页 |
| ·启动子的预测技术 | 第16页 |
| ·启动子的研究方法 | 第16-18页 |
| 4 DNA甲基化的研究 | 第18-19页 |
| ·DNA甲基化的作用 | 第19页 |
| ·DNA甲基化的检测方法 | 第19页 |
| 5 APOA2基因的研究进展 | 第19-20页 |
| 6 SEPW1基因的研究进展 | 第20-21页 |
| 7 研究的目的和意义 | 第21-23页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第23-44页 |
| 1 试验材料 | 第23-25页 |
| ·主要的生化试剂和药品 | 第23页 |
| ·细胞、菌株和载体及猪基因组DNA | 第23页 |
| ·试剂盒 | 第23-24页 |
| ·主要的仪器、设备及耗材 | 第24页 |
| ·缓冲液和常用试剂的配制 | 第24-25页 |
| ·组织表达谱分析的样品 | 第25页 |
| ·DNA甲基化分析的样品 | 第25页 |
| ·主要的生物学软件和网站 | 第25页 |
| 2 试验方法 | 第25-44页 |
| ·猪不同组织总RNA的提取及cDNA的合成 | 第25-27页 |
| ·利用TRIzol试剂同时从猪的不同组织中提取RNA,具体步骤如下 | 第25-26页 |
| ·cDNA的合成 | 第26页 |
| ·猪APOA2和SEPW1基因的组织表达谱 | 第26-27页 |
| ·猪APOA2和SEPW1基因5’侧翼序列的克隆和分析 | 第27-31页 |
| ·基因5’侧翼调控序列的扩增 | 第28页 |
| ·扩增产物的检测及回收 | 第28-29页 |
| ·pMD-18T载体的连接 | 第29页 |
| ·感受态的制备和连接产物的转化 | 第29-30页 |
| ·阳性克隆的筛选及测序 | 第30页 |
| ·小量提取含目的片段的pMD18-T载体的质粒 | 第30-31页 |
| ·猪APOA2和SEPW1基因近端启动子缺失分析 | 第31-41页 |
| ·猪APOA2和SEPW1基因近端启动子生物信息学分析 | 第31页 |
| ·基因5’侧翼调控序列缺失载体的构建 | 第31-34页 |
| ·转染细胞并进行双荧光素酶报告基因检测 | 第34-36页 |
| ·进一步缺失分析寻找转录因子结合位点 | 第36页 |
| ·定点突变试验 | 第36-38页 |
| ·转录因子超表达试验 | 第38页 |
| ·转录因子SP1的siRNA干扰试验 | 第38-41页 |
| ·启动子区域的甲基化研究 | 第41-44页 |
| ·猪组织DNA的提取 | 第41-42页 |
| ·DNA亚硫酸氢盐处理 | 第42-43页 |
| ·PCR扩增、克隆及测序 | 第43-44页 |
| 第三章 实验结果与分析 | 第44-60页 |
| 1 猪APOA2基因的转录调控分析 | 第44-50页 |
| ·猪APOA2基因组织表达谱分析 | 第44页 |
| ·猪APOA2基因5’侧翼调控序列的克隆和分析 | 第44-45页 |
| ·猪APA02基因5’侧翼调控序列的生物信息学分析 | 第45-46页 |
| ·猪APOA2基因5’侧翼调控序列的缺失载体的构建 | 第46-47页 |
| ·猪APOA2基因启动子缺失重组表达载体的活性分析 | 第47-48页 |
| ·进一步缺失分析以寻求转录因子结合位点 | 第48-49页 |
| ·点突变的验证试验 | 第49-50页 |
| 2 猪SEPW1基因的转录调控分析 | 第50-60页 |
| ·猪SEPW1基因组织表达谱分析 | 第50页 |
| ·猪SEPW1基因5侧翼调控序列的克隆和分析 | 第50-51页 |
| ·猪SEPW1基因5'侧翼调控序列的生物信息学分析 | 第51-53页 |
| ·猪SEPW1基因5'侧翼调控序列缺失载体的构建 | 第53页 |
| ·猪SEPW1基因启动子缺失重组表达载体的活性分析 | 第53-55页 |
| ·进一步缺失分析以寻找转录因子结合位点 | 第55页 |
| ·点突变的验证试验 | 第55-56页 |
| ·超表达验证试验 | 第56页 |
| ·siRNA干扰试验 | 第56-57页 |
| ·实时荧光定量PCR检测干扰的效果 | 第56-57页 |
| ·荧光活性检测 | 第57页 |
| ·猪SEPW1基因启动子区域CpG岛甲基化分析 | 第57-60页 |
| ·猪SEPW1基因部分区域CpG岛预测 | 第57页 |
| ·包含CpG岛的片段扩增 | 第57-58页 |
| ·CpG岛甲基化的情况分析 | 第58-59页 |
| ·甲基化与基因表达量的相关分析 | 第59页 |
| ·肌肉组织在不同时期和不同猪种中的甲基化情况分析 | 第59-60页 |
| 第四章 讨论 | 第60-64页 |
| 1 猪APOA2基因转录调控的分析讨论 | 第60-62页 |
| ·猪APOA2基因的组织表达情况分析讨论 | 第60页 |
| ·猪APOA2基因启动子分析讨论 | 第60-61页 |
| ·关于转录因子GATA1的分析讨论 | 第61-62页 |
| 2 猪SEPW1基因转录调控的分析讨论 | 第62-64页 |
| ·猪SEPW1基因的组织表达情况分析讨论 | 第62页 |
| ·猪SEPW1基因启动子分析讨论 | 第62-63页 |
| ·关于转录因子SP1的分析讨论 | 第63-64页 |
| 第五章 小结 | 第64-66页 |
| 1 本研究的主要结果 | 第64-65页 |
| 2 下一步的工作计划 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
