| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-15页 |
| 第一章 综述 | 第15-25页 |
| 1 盐藻的简介 | 第15-16页 |
| ·分类地位 | 第15页 |
| ·形态结构 | 第15页 |
| ·生活习性与繁殖方式 | 第15-16页 |
| 2 盐藻耐盐机制的研究概况 | 第16-19页 |
| ·渗透调节 | 第16-18页 |
| ·细胞的体积变化 | 第16页 |
| ·细胞内甘油含量的变化 | 第16-18页 |
| ·质膜组分变化 | 第18-19页 |
| 3 丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶及其耐盐机制的研究进展 | 第19-21页 |
| ·丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶概述 | 第19页 |
| ·丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶耐盐方面的研究概况 | 第19-21页 |
| ·MAPK 激酶级联途径 | 第20页 |
| ·钙依赖蛋白激酶（CDPK） | 第20-21页 |
| ·其它丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶 | 第21页 |
| ·本研究中的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶 | 第21页 |
| 4 蛋白质亚细胞定位方法 | 第21-24页 |
| ·免疫胶体金标记 | 第22页 |
| ·免疫荧光技术 | 第22页 |
| ·融合报告基因定位法 | 第22-24页 |
| ·农杆菌介导法 | 第22-23页 |
| ·基因枪法 | 第23页 |
| ·电激穿孔法 | 第23-24页 |
| 5 研究目的和意义 | 第24页 |
| 6 研究内容 | 第24-25页 |
| 第二章 DsSTPK基因的原核表达载体与真核表达载体的构建 | 第25-42页 |
| 1 实验材料 | 第25页 |
| ·菌种与质粒 | 第25页 |
| ·主要试剂 | 第25页 |
| ·实验仪器 | 第25页 |
| 2 实验方法 | 第25-38页 |
| ·原核表达载体 pGS-21a-DsSTPK 的构建 | 第25-31页 |
| ·盐藻 DsSTPK 基因的 PCR 扩增 | 第27页 |
| ·目的基因的回收以及与 pMDTM18-T Simple Vector 的连接 | 第27-28页 |
| ·大肠杆菌 DH5α感受态细胞的制备与转化 | 第28-29页 |
| ·克隆载体 pMDTM18-T Simple-DsSTPK 的质粒小量提取 | 第29-30页 |
| ·重组克隆载体 pMDTM18-T simple-DsSTPK 的酶切检测与测序 | 第30页 |
| ·目的片段与表达载体的双酶切 | 第30-31页 |
| ·目的基因片段与载体大片段的连接与转化 | 第31页 |
| ·真核表达载体 pMDCSGN 的构建 | 第31-35页 |
| ·盐藻 DsSTPK 基因的 PCR 扩增 | 第33页 |
| ·目的片段与 pMDTM18-T Simple Vector 的连接 | 第33-34页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌 DH5α感受态细胞并测序 | 第34页 |
| ·质粒 pMDTM18-T Simple-DsSTPK 与表达载体 pMDCMGN-Cat 的双酶切 | 第34页 |
| ·目的基因片段与载体大片段的连接与转化 | 第34-35页 |
| ·真核表达载体 pBI121-DsSTPK 的构建 | 第35-38页 |
| ·盐藻 DsSTPK 基因的 PCR 扩增 | 第36页 |
| ·目的片段与 pMDTM18-T Simple Vector 的连接 | 第36-37页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌 DH5α感受态细胞并测序 | 第37页 |
| ·质粒 pMDTM18-T Simple-DsSTPK 与表达载体 pBI121 的双酶切 | 第37页 |
| ·目的基因片段与载体大片段的连接与转化 | 第37-38页 |
| 3 实验结果 | 第38-40页 |
| ·原核表达载体 pGS-21a-DsSTPK 的构建 | 第38页 |
| ·真核表达载体 pMDCSGN 的构建 | 第38-39页 |
| ·真核表达载体 pBI121-DsSTPK 的构建 | 第39-40页 |
| 4 讨论 | 第40-42页 |
| 第三章 盐藻 DsSTPK 基因的原核表达与纯化 | 第42-51页 |
| 1 实验材料 | 第42页 |
| ·菌种 | 第42页 |
| ·主要试剂 | 第42页 |
| ·实验仪器 | 第42页 |
| 2 实验方法 | 第42-46页 |
| ·重组表达载体转化 E. coli BL21 (DE3) | 第42-43页 |
| ·融合蛋白的诱导表达 | 第43-44页 |
| ·诱导条件优化 | 第43页 |
| ·SDS-PAGE 电泳 | 第43-44页 |
| ·重组蛋白表达形式分析 | 第44页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第44-45页 |
| ·融合蛋白的 Western blotting 检测 | 第45-46页 |
| ·Bradford 法测定蛋白质浓度 | 第46页 |
| 3 实验结果 | 第46-50页 |
| ·融合蛋白的诱导表达 | 第46-47页 |
| ·融合蛋白诱导条件的优化 | 第47-48页 |
| ·融合蛋白表达形式分析 | 第48页 |
| ·融合蛋白的纯化及 Western blotting 鉴定 | 第48-49页 |
| ·Bradford 法测定蛋白质浓度 | 第49-50页 |
| 4 讨论 | 第50-51页 |
| 第四章 盐藻 DsSTPK 基因的亚细胞定位分析 | 第51-56页 |
| 1 实验材料 | 第51页 |
| ·菌种 | 第51页 |
| ·主要试剂 | 第51页 |
| ·实验仪器 | 第51页 |
| 2 实验方法 | 第51-53页 |
| ·重组表达载体 pMDCSGN 的大量提取 | 第51-52页 |
| ·根癌农杆菌 LBA4404 感受态的制备与电击转化 | 第52-53页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第52页 |
| ·重组表达载体转化农杆菌感受态细胞 | 第52-53页 |
| ·菌液 PCR 验证重组质粒是否导入农杆菌 | 第53页 |
| ·农杆菌介导法侵染洋葱表皮细胞 | 第53页 |
| 3 实验结果 | 第53-55页 |
| ·农杆菌菌液 PCR | 第53-54页 |
| ·DsSTPK 在洋葱表皮细胞内的分布 | 第54-55页 |
| 4 讨论 | 第55-56页 |
| 结论与展望 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-64页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第64-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 附录 | 第68-70页 |
