| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-13页 |
| English Catalogue | 第13-18页 |
| 第一章 综述 | 第18-28页 |
| 1 盐藻的分子生物学研究概况 | 第18-22页 |
| ·盐藻主要功能基因的研究 | 第18-20页 |
| ·盐藻调控序列的研究 | 第20页 |
| ·启动子 | 第20页 |
| ·转基因沉默 | 第20-21页 |
| ·盐藻作为宿主表达外源基因 | 第21页 |
| ·盐藻基因组 DNA 文库、cDNA 文库的构建 | 第21页 |
| ·盐藻的经济价值 | 第21-22页 |
| 2 淀粉代谢及淀粉磷酸化酶的研究 | 第22-27页 |
| ·淀粉代谢 | 第22页 |
| ·淀粉的分类 | 第22-23页 |
| ·淀粉的生物合成 | 第23-24页 |
| ·植物中淀粉的降解 | 第24-25页 |
| ·淀粉磷酸化酶（SP 或 Pho） | 第25页 |
| ·淀粉磷酸化酶参与淀粉代谢 | 第25页 |
| ·淀粉磷酸化酶参与淀粉的合成 | 第25-26页 |
| ·淀粉磷酸化酶参与淀粉的降解 | 第26-27页 |
| 3 研究目的和意义 | 第27页 |
| 4 研究内容 | 第27-28页 |
| 第二章 盐藻 DsSP 基因全长 cDNA 的克隆 | 第28-47页 |
| 1 材料 | 第28-29页 |
| ·实验材料 | 第28页 |
| ·实验仪器 | 第28-29页 |
| 2 方法 | 第29-41页 |
| ·盐藻总 RNA 的提取 | 第29-30页 |
| ·实验用品 | 第29页 |
| ·总 RNA 提取 | 第29-30页 |
| ·总 RNA 质量分析 | 第30页 |
| ·RT-PCR 扩增 DsSP 中间段保守序列 | 第30-34页 |
| ·兼并引物的设计 | 第30页 |
| ·反转录 | 第30页 |
| ·DsSP 基因保守序列 PCR 扩增 | 第30-31页 |
| ·凝胶回收、连接、转化 | 第31-33页 |
| ·质粒 DNA 的提取 | 第33-34页 |
| ·质粒的酶切鉴定 | 第34页 |
| ·盐藻 DsSP 的 3′-RACE | 第34-36页 |
| ·3 ′-RACE 的引物设计 | 第34页 |
| ·反转录 | 第34-35页 |
| ·第一轮的扩增 | 第35-36页 |
| ·第二轮的扩增 | 第36页 |
| ·验证 | 第36页 |
| ·盐藻 DsSP 的中间段向 5′端延长的扩增 | 第36-37页 |
| ·引物的设计 | 第36-37页 |
| ·反转录 | 第37页 |
| ·PCR 的扩增 | 第37页 |
| ·验证 | 第37页 |
| ·盐藻 DsSP 的 5′-RACE | 第37-40页 |
| ·5 ′-RACE 的引物设计 | 第37-38页 |
| ·反转录 | 第38页 |
| ·第一轮的扩增 | 第38-39页 |
| ·第二轮的扩增 | 第39页 |
| ·验证 | 第39-40页 |
| ·盐藻 DsSP 全长序列的扩增 | 第40-41页 |
| ·引物的设计 | 第40页 |
| ·反转录 | 第40页 |
| ·PCR 的扩增 | 第40-41页 |
| ·验证 | 第41页 |
| 3 实验结果 | 第41-45页 |
| ·盐藻总 RNA 的提取 | 第41页 |
| ·盐藻 DsSP 基因的克隆 | 第41页 |
| ·DsSP 基因保守片段的克隆 | 第41-42页 |
| ·DsSP 基因 3′端的扩增 | 第42-43页 |
| ·DsSP 基因中间段向 5′端延长的扩增 | 第43页 |
| ·DsSP 基因 5′端的扩增 | 第43-44页 |
| ·DsSP 全长的扩增 | 第44-45页 |
| 4 讨论 | 第45-47页 |
| ·RNA 提取 | 第45-46页 |
| ·RACE | 第46-47页 |
| 第三章 盐藻 DsSP 基因的生物信息学分析 | 第47-58页 |
| 1 方法 | 第47页 |
| ·核酸序列分析 | 第47页 |
| ·氨基酸序列分析 | 第47页 |
| 2 分析结果 | 第47-56页 |
| ·核酸序列分析 | 第47-51页 |
| ·核酸序列组成分析 | 第47-48页 |
| ·开放阅读框(ORF)分析 | 第48-51页 |
| ·DsSP 的开放阅读框酶切位点分析 | 第51页 |
| ·氨基酸序列分析 | 第51-56页 |
| ·基本理化性质分析 | 第51-52页 |
| ·亚细胞定位预测 | 第52页 |
| ·稀有密码子分析 | 第52-53页 |
| ·信号肽分析 | 第53-54页 |
| ·跨膜预测 | 第54页 |
| ·保守结构域的预测 | 第54-55页 |
| ·磷酸化位点预测 | 第55页 |
| ·二级结构预测 | 第55页 |
| ·三级结构预测 | 第55-56页 |
| ·进化树 | 第56页 |
| 3 讨论 | 第56-58页 |
| 第四章 DsSP 的原核表达 | 第58-68页 |
| 1 材料 | 第58-59页 |
| ·菌种和质粒 | 第58页 |
| ·主要试剂 | 第58页 |
| ·实验仪器 | 第58-59页 |
| 2 实验方法 | 第59-64页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第59-61页 |
| ·带有 EcoRI 和 SalI 的开放阅读框扩增 | 第60页 |
| ·原核表达载体构建 | 第60-61页 |
| ·融合蛋白的诱导表达 | 第61-62页 |
| ·小量诱导表达 | 第61页 |
| ·SDS-PAGE 电泳 | 第61-62页 |
| ·大量诱导表达 | 第62页 |
| ·融合蛋白的可溶性分析 | 第62页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第62-63页 |
| ·Bradford 法测定纯化的蛋白质浓度 | 第63页 |
| ·制作标准曲线 | 第63页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第63页 |
| ·Western 印迹检测 | 第63-64页 |
| 3 实验结果 | 第64-66页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第64-65页 |
| ·融合蛋白的诱导表达和表达形式 | 第65页 |
| ·融合蛋白的纯化和鉴定 | 第65-66页 |
| ·Bradford 法测定蛋白质浓度 | 第66页 |
| 4 讨论 | 第66-68页 |
| 结论与展望 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-74页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第74-77页 |
| 致谢 | 第77-79页 |
| 附录 | 第79-81页 |