| 符号说明 | 第1-9页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 1 前言 | 第13-26页 |
| ·WRKY 转录因子的发现、起源与进化 | 第13-14页 |
| ·WRKY 转录因子的结构特点 | 第14-15页 |
| ·WRKY 转录因子的分类 | 第15-16页 |
| ·WRKY 转录因子与 W-box 结合 | 第16-17页 |
| ·WRKY 转录因子的表达特点 | 第17-18页 |
| ·WRKY 转录因子的多样化功能 | 第18-22页 |
| ·WRKY 调控植物抗病防卫反应 | 第18-19页 |
| ·WRKY 调控植物的非生物胁迫应答反应 | 第19-20页 |
| ·WRKY 在植物生长发育和物质代谢过程中的作用 | 第20-21页 |
| ·WRKY 调控植物衰老过程 | 第21-22页 |
| ·WRKY 转录因子调控植物逆境反应的机理 | 第22-25页 |
| ·本实验的目的意义 | 第25-26页 |
| 2 材料与方法 | 第26-49页 |
| ·实验材料 | 第26-28页 |
| ·植物材料 | 第26页 |
| ·菌株与质粒 | 第26页 |
| ·酶与各种生化试剂 | 第26页 |
| ·PCR 引物 | 第26-28页 |
| ·实验方法 | 第28-49页 |
| ·植物材料的培养与处理 | 第28页 |
| ·利用 TRIzol 试剂盒提取 RNA | 第28页 |
| ·RNA 中基因组 DNA 的去除 | 第28-29页 |
| ·甲醛变性凝胶进行 RNA 电泳 | 第29页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第29-30页 |
| ·cDNA 纯化和加尾反应（用于 5￠ RACE） | 第30-31页 |
| ·cDNA 的纯化 | 第30页 |
| ·cDNA 5'末端加尾反应 | 第30-31页 |
| ·GhWRKY17 全长 cDNA 序列的获得 | 第31-33页 |
| ·利用简并引物进行 PCR 扩增以获得中间片段 | 第31页 |
| ·5'RACE 获得 5'端序列 | 第31-32页 |
| ·3'RACE 获得 3'端序列 | 第32-33页 |
| ·cDNA 全长序列的获得 | 第33页 |
| ·电泳目的片段的回收 | 第33-34页 |
| ·目的片段与克隆载体的连接 | 第34页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第34-35页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第34页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第34-35页 |
| ·试剂盒微量提取大肠杆菌质粒 DNA | 第35页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第35-36页 |
| ·DNA 序列测定 | 第36页 |
| ·植物基因组 DNA 的提取 | 第36页 |
| ·CTAB 法提取基因组 DNA | 第36页 |
| ·植物基因组 DNA 的纯化 | 第36页 |
| ·GhWRKY17 全长基因组序列的获得 | 第36-37页 |
| ·实时荧光定量 PCR 分析 GhWRKY17 的拷贝数 | 第37-38页 |
| ·GhWRKY17 启动子序列的获得 | 第38-39页 |
| ·半定量 RT-PCR 分析 GhWRKY17 的表达 | 第39页 |
| ·基因枪基因瞬时表达 | 第39-42页 |
| ·洋葱表皮瞬时表达的载体制备 | 第39-40页 |
| ·大量法提取质粒 DNA | 第40-41页 |
| ·基因枪微弹的准备 | 第41页 |
| ·基因枪转化 | 第41-42页 |
| ·酵母单杂交 | 第42-43页 |
| ·构建 pW-box-AbAi 诱饵质粒 | 第42-43页 |
| ·构建 pGAD-GhWRKY17 表达载体 | 第43页 |
| ·酵母杂交验证 | 第43页 |
| ·农杆菌介导的瞬时表达系统 | 第43-45页 |
| ·W-box-35S mini-GUS 与 35S mini-GUS 载体的构建 | 第43-44页 |
| ·GhWRKY17 植物表达载体的构建 | 第44页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第44页 |
| ·农杆菌感受态细胞的转化 | 第44页 |
| ·农杆菌介导的瞬时侵染 | 第44-45页 |
| ·GUS 组织化学染色 | 第45页 |
| ·GhWRKY17 超表达植株的获得 | 第45-46页 |
| ·农杆菌的培养 | 第45页 |
| ·农杆菌介导转化烟草 | 第45-46页 |
| ·转基因植株的鉴定 | 第46-47页 |
| ·小量法提取基因组 DNA | 第46页 |
| ·PCR 验证阳性转化株 | 第46-47页 |
| ·组织化学染色分析 | 第47页 |
| ·网络资源及数据库 | 第47-48页 |
| ·生物学软件 | 第48-49页 |
| 3 结果与分析 | 第49-71页 |
| ·棉花 GhWRKY17 基因的分离 | 第49-53页 |
| ·GhWRKY17 中间片段的分离 | 第49页 |
| ·GhWRKY17 5'非编码区的分离 | 第49页 |
| ·GhWRKY17 3'非编码区的分离 | 第49-50页 |
| ·GhWRKY17 全长 cDNA 的克隆 | 第50页 |
| ·GhWRKY17 全长 cDNA 序列分析 | 第50-51页 |
| ·GhWRKY17 编码的蛋白质序列分析及其进化分析 | 第51-53页 |
| ·GhWRKY17 基因组序列的克隆及分析 | 第53-55页 |
| ·GhWRKY17 全长基因组的分离及序列分析 | 第53-54页 |
| ·GhWRKY17 的拷贝数分析 | 第54-55页 |
| ·GhWRKY17 启动子序列的分离及顺式作用元件的预测 | 第55-56页 |
| ·GhWRKY17 的表达模式分析 | 第56-58页 |
| ·GhWRKY17 的组织特异性分析 | 第56页 |
| ·GhWRKY17 在非生物胁迫下的表达特性分析 | 第56-57页 |
| ·GhWRKY17 在信号分子诱导下的表达特性分析 | 第57-58页 |
| ·GhWRKY17 的转录因子特性分析 | 第58-59页 |
| ·GhWRKY17 的亚细胞定位 | 第58页 |
| ·GhWRKY17 与 W-box 特异性结合 | 第58-59页 |
| ·GhWRKY17 参与调节植物的干旱与高盐胁迫反应及其分子机理 | 第59-71页 |
| ·GhWRKY17 超表达植株的获得 | 第60-61页 |
| ·超表达 GhWRKY17 使转基因植株对 ABA 敏感 | 第61-62页 |
| ·GhWRKY17 超表达植株在种子萌发期对干旱、高盐敏感 | 第62-63页 |
| ·超表达植株在种子萌发后的生长对干旱、高盐敏感 | 第63-64页 |
| ·GhWRKY17 调节转基因植株对干旱、高盐胁迫的应答与 ABA 有关 | 第64-65页 |
| ·超表达 GhWRKY17 在成苗期对干旱、高盐胁迫敏感 | 第65-67页 |
| ·GhWRKY17 转基因植株积累了较多的 ROS 从而加重了氧化损伤 | 第67-69页 |
| ·超表达 GhWRKY17 降低了转基因植物的抗氧化酶活性 | 第69页 |
| ·GhWRKY17 转基因植株对氧化胁迫敏感 | 第69-71页 |
| 4 讨论 | 第71-75页 |
| 5 结论 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第83-84页 |
| 附件 | 第84页 |
