摘要 | 第1-7页 |
Abstract | 第7-17页 |
第一章 综述 | 第17-31页 |
·鸭疫里氏杆菌病的概述 | 第17-20页 |
·鸭疫里氏杆菌分类地位及命名 | 第17页 |
·鸭疫里氏杆菌的形态及生长特性 | 第17-18页 |
·鸭疫里氏杆菌的理化特征 | 第18页 |
·鸭疫里氏杆菌的临床症状及病理变化 | 第18-19页 |
·鸭疫里氏杆菌的流行病学特性 | 第19页 |
·鸭疫里氏杆菌的血清型研究 | 第19-20页 |
·鸭疫里氏杆菌毒力因子的研究 | 第20-24页 |
·溶血素 | 第20-21页 |
·外膜蛋白 | 第21-22页 |
·荚膜多糖 | 第22-23页 |
·脂多糖 | 第23页 |
·粘附素 | 第23-24页 |
·热休克蛋白 | 第24页 |
·鸭疫里氏杆菌诊断技术 | 第24-27页 |
·涂片镜检 | 第24页 |
·细菌的分离培养 | 第24-25页 |
·琼脂扩散沉淀试验 | 第25页 |
·间接血凝试验 | 第25页 |
·聚合酶链反应 | 第25-26页 |
·环介导等温扩增技术 | 第26页 |
·荧光抗体技术 | 第26页 |
·间接酶联免疫吸附试验 | 第26-27页 |
·鸭疫里氏杆菌防治及其疫苗研究 | 第27-29页 |
·药物防治 | 第27页 |
·疫苗的预防 | 第27-29页 |
·乳胶凝集试验的研究进展 | 第29-30页 |
·乳胶凝集试验的原理 | 第29页 |
·乳胶凝集试验的研究现状 | 第29-30页 |
·本研究的目的和意义 | 第30-31页 |
第二章 鸭疫里氏杆菌的分离鉴定及其对SPF鸭的致病性研究 | 第31-42页 |
·材料和方法 | 第31-35页 |
·菌株、血清和质粒 | 第31页 |
·病料来源和实验动物 | 第31页 |
·主要试剂 | 第31页 |
·主要仪器设备 | 第31页 |
·细菌分离和生化鉴定 | 第31页 |
·血清型的鉴定 | 第31页 |
·细菌药敏试验 | 第31-32页 |
·OmpA基因的引物设计与合成 | 第32页 |
·基因组DNA的制备 | 第32页 |
·OmpA基因的PCR扩增 | 第32-33页 |
·PCR产物的回收与纯化 | 第33页 |
·感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第33-34页 |
·纯化产物OmpA的连接与转化 | 第34页 |
·提取重组质粒OmpA | 第34-35页 |
·重组质粒的酶切鉴定和序列分析 | 第35页 |
·HLG1分离株对SPF鸭的致病性试验 | 第35页 |
·结果 | 第35-40页 |
·细菌的分离与鉴定结果 | 第35页 |
·生化鉴定结果 | 第35页 |
·血清型的鉴定结果 | 第35页 |
·药敏试验结果 | 第35-36页 |
·OmpA基因PCR扩增结果 | 第36-37页 |
·重组质粒酶切鉴定结果 | 第37页 |
·OmpA基因序列系统进化树分析结果 | 第37-38页 |
·HLG1分离株对SPF鸭的致病性试验结果 | 第38-40页 |
·讨论 | 第40-42页 |
第三章 鸭疫里氏杆菌主要蛋白的克隆、表达和抗原性分析 | 第42-65页 |
·材料和方法 | 第42-50页 |
·菌株和质粒 | 第42页 |
·主要试剂 | 第42页 |
·主要仪器设备 | 第42页 |
·实验动物 | 第42页 |
·主要试剂的配方 | 第42-45页 |
·引物设计与合成 | 第45页 |
·PCR扩增Riean-0791、Riean-1110和Riean-1852基因 | 第45页 |
·PCR产物的回收与纯化 | 第45页 |
·连接与转化 | 第45页 |
·重组质粒与测序分析 | 第45-46页 |
·重组表达质粒的构建及其酶切鉴定 | 第46页 |
·重组质粒的诱导表达与SDS-PAGE分析 | 第46-47页 |
·包涵体蛋白的纯化 | 第47页 |
·表达产物的Westernblot分析 | 第47页 |
·免疫接种及攻毒保护试验 | 第47-48页 |
·免疫鸭血清的抗体效价的测定 | 第48-49页 |
·细菌膜蛋白的提取方法 | 第49页 |
·细菌膜蛋白的SDS-PAGE电泳与Westernblot鉴定 | 第49-50页 |
·结果 | 第50-63页 |
·Riean-0791基因的克隆、表达及鉴定结果 | 第50-52页 |
·Riean-1110基因的克隆、表达及鉴定结果 | 第52-55页 |
·Riean1852基因的克隆、表达及鉴定结果 | 第55-57页 |
·RA-HLG1菌液对免疫鸭的攻毒免疫保护试验结果 | 第57-58页 |
·免疫鸭血清抗体效价的检测结果 | 第58-62页 |
·RA-HLG1株细菌外膜蛋白的提取结果 | 第62-63页 |
·Riean0791、Riean1110和Riean1852蛋白在细菌中的定位结果 | 第63页 |
·讨论 | 第63-65页 |
第四章 乳胶凝集试验方法(LAT)的建立及其应用 | 第65-77页 |
·材料和方法 | 第65-68页 |
·主要试剂 | 第65页 |
·乳胶凝集相关缓冲液的配制 | 第65页 |
·蛋白的复性 | 第65页 |
·羧化乳胶的致敏方法 | 第65-66页 |
·最佳偶联蛋白量的选择 | 第66页 |
·最佳偶联时间的选择 | 第66页 |
·最佳羧化乳胶浓度的选择 | 第66页 |
·乳胶封闭剂的选择 | 第66页 |
·偶联反应终止剂的选择 | 第66-67页 |
·乳胶凝集试验检测操作及其结果的判定 | 第67页 |
·特异性和敏感性试验 | 第67页 |
·乳胶凝集试验的重复性试验 | 第67页 |
·乳胶抗原的保存期试验 | 第67页 |
·乳胶抗原自凝性检测 | 第67-68页 |
·乳胶凝集试验和间接酶联免疫吸附试验符合率试验 | 第68页 |
·结果 | 第68-75页 |
·最佳偶联Riean0791蛋白量的确定 | 第68页 |
·最佳偶联时间的确定 | 第68-69页 |
·最佳羧化乳胶浓度的选择 | 第69页 |
·封闭剂的选择 | 第69页 |
·特异性试验结果 | 第69-70页 |
·敏感性试验结果 | 第70页 |
·偶联反应终止剂的选择 | 第70页 |
·批内重复性试验结果 | 第70-72页 |
·批间重复性试验结果 | 第72-74页 |
·乳胶抗原保存期检测结果 | 第74页 |
·乳胶抗原自凝性检测结果 | 第74页 |
·乳胶凝集试验(LAT)与间接ELISA的符合率试验结果 | 第74-75页 |
·讨论 | 第75-77页 |
第五章 全文结论 | 第77-78页 |
参考文献 | 第78-90页 |
致谢 | 第90-91页 |
作者简历 | 第91-92页 |
附录 | 第92-93页 |