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鸡沙门菌病抗体间接ELISA检测方法的建立

摘要第1-8页
Abstract第8-10页
缩略词表第10-11页
1 前言第11-21页
   ·沙门菌属简介第11页
   ·沙门菌病及其流行情况第11-14页
     ·人沙门菌病及其流行情况第11-12页
     ·沙门菌对养鸡场的危害及流行情况第12-14页
   ·沙门菌病的诊断方法第14-19页
     ·常规分离鉴定病原的方法第14页
     ·玻板凝集试验检测沙门菌抗体第14-15页
     ·PCR技术检测检测沙门菌第15-16页
     ·LAMP技术检测沙门菌第16-17页
     ·免疫磁珠技术第17页
     ·免疫层析技术第17-18页
     ·ELISA方法检测沙门菌病第18-19页
   ·沙门菌三型分泌系统结构、组成简介第19-20页
   ·目的与意义第20-21页
2 材料方法第21-30页
   ·试验材料第21-24页
     ·菌株、质粒、血清第21页
     ·仪器第21页
     ·主要试剂第21-22页
     ·主要溶液和培养基第22-24页
   ·目的基因的选取及同源性分析第24页
   ·目的基因的克隆与融合蛋白的表达第24-27页
     ·目的基因的扩增第24-25页
     ·重组质粒的构建第25页
     ·重组质粒的鉴定第25-26页
     ·重组蛋白表达产物的分析第26页
     ·不同培养基、诱导剂对蛋白表达的影响第26页
     ·重组蛋白的纯化第26-27页
     ·Western-Blot鉴定融合蛋白免疫活性第27页
   ·沙门菌InvJ抗体间接ELISA检测方法的建立第27-29页
     ·重组抗原包被浓度及血清稀释度的确定第27页
     ·最佳抗原包被液的确定第27-28页
     ·封闭液的确定第28页
     ·封闭时间的优化第28页
     ·血清作用时间的优化第28页
     ·酶标二抗作用时间的优化第28页
     ·显色时间的优化第28页
     ·阴性临界值的确定第28-29页
   ·间接ELISA性能评价第29页
     ·特异性试验第29页
     ·重复性试验第29页
   ·血清样品的初步检测第29-30页
3 结果与分析第30-43页
   ·蛋白选择及同源性分析第30-31页
   ·基因的克隆与表达第31-35页
     ·目的基因的扩增第31页
     ·重组质粒的鉴定第31页
     ·重组蛋白表达产物的分析第31-32页
     ·不同培养基、诱导剂对蛋白表达的影响第32-33页
     ·重组蛋白的纯化第33-34页
     ·Western-Blot鉴定融合蛋白免疫活性第34-35页
   ·沙门菌InvJ抗体间接ELISA检测方法的建立第35-41页
     ·重组抗原包被浓度和血清稀释度的确定第35-36页
     ·最佳抗原包被液的确定第36页
     ·包被时间的确定第36-37页
     ·封闭液的选择第37页
     ·封闭时间的优化第37-38页
     ·血清作用时间的优化第38页
     ·最佳血清稀释液的选择第38-39页
     ·酶标二抗作用时间的优化第39页
     ·显色时间的优化第39-40页
     ·间接ELISA操作方法的确定第40页
     ·阴性临界值的确定第40-41页
   ·间接ELISA可靠性试验第41-42页
     ·特异性试验第41页
     ·重复性试验第41-42页
   ·血清样品的初步检测第42-43页
4 讨论第43-44页
   ·目的蛋白的选取第43页
   ·融合蛋白的诱导表达第43页
   ·间接ELISA检测沙门菌抗体第43-44页
5 试验结论第44-45页
参考文献第45-50页
致谢第50页

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