鸡沙门菌病抗体间接ELISA检测方法的建立
| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第11-21页 |
| ·沙门菌属简介 | 第11页 |
| ·沙门菌病及其流行情况 | 第11-14页 |
| ·人沙门菌病及其流行情况 | 第11-12页 |
| ·沙门菌对养鸡场的危害及流行情况 | 第12-14页 |
| ·沙门菌病的诊断方法 | 第14-19页 |
| ·常规分离鉴定病原的方法 | 第14页 |
| ·玻板凝集试验检测沙门菌抗体 | 第14-15页 |
| ·PCR技术检测检测沙门菌 | 第15-16页 |
| ·LAMP技术检测沙门菌 | 第16-17页 |
| ·免疫磁珠技术 | 第17页 |
| ·免疫层析技术 | 第17-18页 |
| ·ELISA方法检测沙门菌病 | 第18-19页 |
| ·沙门菌三型分泌系统结构、组成简介 | 第19-20页 |
| ·目的与意义 | 第20-21页 |
| 2 材料方法 | 第21-30页 |
| ·试验材料 | 第21-24页 |
| ·菌株、质粒、血清 | 第21页 |
| ·仪器 | 第21页 |
| ·主要试剂 | 第21-22页 |
| ·主要溶液和培养基 | 第22-24页 |
| ·目的基因的选取及同源性分析 | 第24页 |
| ·目的基因的克隆与融合蛋白的表达 | 第24-27页 |
| ·目的基因的扩增 | 第24-25页 |
| ·重组质粒的构建 | 第25页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第25-26页 |
| ·重组蛋白表达产物的分析 | 第26页 |
| ·不同培养基、诱导剂对蛋白表达的影响 | 第26页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第26-27页 |
| ·Western-Blot鉴定融合蛋白免疫活性 | 第27页 |
| ·沙门菌InvJ抗体间接ELISA检测方法的建立 | 第27-29页 |
| ·重组抗原包被浓度及血清稀释度的确定 | 第27页 |
| ·最佳抗原包被液的确定 | 第27-28页 |
| ·封闭液的确定 | 第28页 |
| ·封闭时间的优化 | 第28页 |
| ·血清作用时间的优化 | 第28页 |
| ·酶标二抗作用时间的优化 | 第28页 |
| ·显色时间的优化 | 第28页 |
| ·阴性临界值的确定 | 第28-29页 |
| ·间接ELISA性能评价 | 第29页 |
| ·特异性试验 | 第29页 |
| ·重复性试验 | 第29页 |
| ·血清样品的初步检测 | 第29-30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-43页 |
| ·蛋白选择及同源性分析 | 第30-31页 |
| ·基因的克隆与表达 | 第31-35页 |
| ·目的基因的扩增 | 第31页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第31页 |
| ·重组蛋白表达产物的分析 | 第31-32页 |
| ·不同培养基、诱导剂对蛋白表达的影响 | 第32-33页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第33-34页 |
| ·Western-Blot鉴定融合蛋白免疫活性 | 第34-35页 |
| ·沙门菌InvJ抗体间接ELISA检测方法的建立 | 第35-41页 |
| ·重组抗原包被浓度和血清稀释度的确定 | 第35-36页 |
| ·最佳抗原包被液的确定 | 第36页 |
| ·包被时间的确定 | 第36-37页 |
| ·封闭液的选择 | 第37页 |
| ·封闭时间的优化 | 第37-38页 |
| ·血清作用时间的优化 | 第38页 |
| ·最佳血清稀释液的选择 | 第38-39页 |
| ·酶标二抗作用时间的优化 | 第39页 |
| ·显色时间的优化 | 第39-40页 |
| ·间接ELISA操作方法的确定 | 第40页 |
| ·阴性临界值的确定 | 第40-41页 |
| ·间接ELISA可靠性试验 | 第41-42页 |
| ·特异性试验 | 第41页 |
| ·重复性试验 | 第41-42页 |
| ·血清样品的初步检测 | 第42-43页 |
| 4 讨论 | 第43-44页 |
| ·目的蛋白的选取 | 第43页 |
| ·融合蛋白的诱导表达 | 第43页 |
| ·间接ELISA检测沙门菌抗体 | 第43-44页 |
| 5 试验结论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-50页 |
| 致谢 | 第50页 |
