| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-13页 |
| 引言 | 第13-14页 |
| 第一部分 文献综述 | 第14-27页 |
| ·杆状病毒概论 | 第14-16页 |
| ·杆状病毒的结构分类及基因结构 | 第14-15页 |
| ·杆状病毒DNA的复制原点及复制方式 | 第15页 |
| ·杆状病毒的感染周期 | 第15-16页 |
| ·杆状病毒表达载体系统 | 第16-21页 |
| ·杆状病毒作为基因表达载体的条件载体 | 第16-17页 |
| ·杆状病毒的受体系统 | 第17页 |
| ·构建重组杆状病毒的传统技术原理 | 第17-18页 |
| ·杆状病毒表达载体系统的发展 | 第18-21页 |
| ·杆状病毒表达系统的应用 | 第21-22页 |
| ·基础研究中的应用 | 第21页 |
| ·开发医用疫苗和药物 | 第21页 |
| ·农林牧渔业中的应用 | 第21-22页 |
| ·杆状病毒表达系统的优势与不足 | 第22-23页 |
| ·杆状病毒表达系统的优势 | 第22-23页 |
| ·杆状病毒表达系统的不足 | 第23页 |
| ·核酸内切酶mazf的研究概况 | 第23-24页 |
| ·本文的研究依据 | 第24-25页 |
| ·本文的研究目的 | 第25-27页 |
| 第二部分 材料与方法 | 第27-39页 |
| ·材料 | 第27-31页 |
| ·菌株 | 第27页 |
| ·供试质粒 | 第27-28页 |
| ·细胞系 | 第28页 |
| ·培养基 | 第28页 |
| ·试剂和酶 | 第28-29页 |
| ·仪器和设备 | 第29页 |
| ·主要缓冲液 | 第29-30页 |
| ·引物 | 第30-31页 |
| ·载体改造引物 | 第30-31页 |
| ·目的基因引物 | 第31页 |
| ·目的基因定点诱变引物 | 第31页 |
| ·方法 | 第31-39页 |
| ·质粒DNA的抽提及纯化 | 第31-32页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第32页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第32-33页 |
| ·LIC克隆 | 第33页 |
| ·magic克隆方法构建重组杆状病毒Bacmid | 第33页 |
| ·杆状病毒-昆虫表达系统表达目的蛋白 | 第33-35页 |
| ·昆虫细胞的培养与传代 | 第33-34页 |
| ·昆虫细胞的冻存 | 第34页 |
| ·昆虫细胞的复苏 | 第34页 |
| ·昆虫细胞Sf9的转染 | 第34-35页 |
| ·杆状病毒粒子的扩增 | 第35页 |
| ·目的蛋白在杆状病毒—昆虫表达系统中的表达 | 第35页 |
| ·SDS -PAGE检测纯化蛋白 | 第35-36页 |
| ·Western blot | 第36-38页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第38-39页 |
| 第三部分 结果与分析 | 第39-54页 |
| ·杆状病毒供体质粒pmha的突变 | 第39-43页 |
| ·针对pmha-kg(2)-his-gfp-Mazf基因序列特定部位(ACA)的查找 | 第39-40页 |
| ·杆状病毒供体质粒pmha的突变 | 第40-43页 |
| ·杆状病毒供体质粒pmha的突变后改造 | 第43-46页 |
| ·杆状病毒供体质粒融合蛋白表达单元的构建 | 第43-46页 |
| ·目的基因的定点突变和重组供体质粒mh(b)-gam-mazf的构建 | 第46-49页 |
| ·针对gam基因序列特定部位(ACA)的查找 | 第46-47页 |
| ·目的片段gam基因的定点诱变 | 第47-49页 |
| ·重组杆状病毒的构建 | 第49-50页 |
| ·携带有gam基因的昆虫杆状病毒表达载体的构建 | 第50-51页 |
| ·重组杆状病毒质粒在Sf9昆虫细胞中的表达及待测样品蛋白质总浓度的测定及Western blot分析 | 第51-54页 |
| 第四部分 讨论与展望 | 第54-56页 |
| ·讨论 | 第54-55页 |
| ·展望 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
