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松材线虫休眠相关基因daf-3、daf-9、daf-12、daf-16的克隆及其功能研究

摘要第1-7页
Abstract第7-16页
第一章 文献综述第16-32页
   ·松材线虫概况第16-22页
     ·松材线虫的形态特征第17页
     ·松材线虫的生活史第17-19页
     ·松材线虫的危害第19页
     ·松材线虫病的病因及致病机理第19-21页
     ·松材线虫的防治第21-22页
   ·模式线虫滞育机制研究进展第22-26页
     ·模式线虫的滞育第22-23页
     ·模式线虫滞育的分子机制第23-26页
   ·植物寄生线虫 RNAI 研究进展第26-30页
     ·RNAi 的特点及应用第27-28页
     ·植物寄生线虫 RNAi 研究进展第28-30页
   ·本研究的目的和意义第30-32页
第二章 松材线虫休眠相关基因 DAF-3、DAF-9、DAF-12、DAF-16的克隆第32-64页
   ·材料与方法第32-44页
     ·实验材料第32-33页
     ·实验方法第33-44页
   ·结果与分析第44-63页
     ·松材线虫 daf-3、daf-9、daf-12、daf-16 基因片段的克隆第44页
     ·松材线虫 daf-3、daf-9、daf-12、daf-16-1、daf16-2 基因RACE 结果与分析第44-46页
     ·松材线虫 daf-3、daf-9、daf-12、daf-16-1、daf16-2 基因 cDNA全长及氨基酸序列预测第46-52页
     ·松材线虫 daf-3、daf-9、daf-12、daf-16-1、daf16-2 基因内含子的扩增第52-55页
     ·松材线虫 daf-3、daf-9、daf-12、daf16-1、daf16-2 基因蛋白序列的比对第55-58页
     ·松材线虫 daf-3、daf-9、daf-12、daf-16-1、daf-16-2 进化分析第58-60页
     ·松材线虫 daf-3、daf-9、daf-12、daf16-1、daf16-2 基因在松材线虫基因组中的拷贝数分析第60-61页
     ·松材线虫 daf-9、daf-12、daf-16 基因结构与其它线虫的比较第61-62页
     ·中国松材线虫与日本松材线虫 daf-3、daf-9、daf-12、daf-16基因的比较第62-63页
   ·小结第63-64页
第三章 基因 DAF-9、DAF-12 在松材线虫不同发育阶段的表达模式分析第64-74页
   ·材料与方法第64-67页
     ·实验材料第64页
     ·实验方法第64-67页
   ·结果与分析第67-71页
     ·松材线虫 daf-9、daf-12 基因启动子克隆及分析第67-69页
     ·松材线虫不同虫态中 daf-9、daf-12 基因的表达分析第69-71页
   ·小结与讨论第71-74页
第四章 逆境下松材线虫 DAF-3、DAF-9、DAF-12、DAF-16 基因的表达动态分析第74-90页
   ·材料与方法第74-80页
     ·材料第74页
     ·方法第74-80页
   ·结果与分析第80-88页
     ·不同培养时间对松材线虫 daf-3、daf-9、daf-12、daf-16-1、daf-16-2 基因表达的影响第80-83页
     ·不同温度处理对松材线虫 daf-3、daf-9、daf-12、daf-16-1、daf-16-2 基因表达的影响第83-85页
     ·抗血清制备第85-86页
     ·抗体纯化第86-87页
     ·松材线虫 daf-16-2 基因蛋白表达水平第87-88页
   ·小结第88-90页
第五章 松材线虫 DAF-3、DAF-9、DAF-12、DAF-16 基因的 RNAI干扰效应分析第90-110页
   ·材料与方法第90-99页
     ·实验材料第90-91页
     ·实验方法第91-99页
   ·结果与分析第99-107页
     ·农杆菌介导丝状真菌表达 dsRNA 载体 PHD-RH 的构建 .84第99-101页
     ·转基因灰葡萄孢菌的 PCR 鉴定第101-102页
     ·转基因灰葡萄孢菌 southern 杂交鉴定第102-103页
     ·靶标基因 dsRNA 在灰葡萄孢菌中的表达检测第103页
     ·喂饲表达松材线虫 daf-3、daf-9、daf-12、daf-16-1、daf-16-2基因 dsRNA 的灰葡萄孢菌对松材线虫靶标基因的表达量的影响第103-104页
     ·喂饲表达量松材线虫 daf-3、daf-9、daf-12、daf-16 基因dsRNA 的灰葡萄孢菌对松材线虫发育速度和繁殖数量的影响第104-105页
     ·喂饲表达量松材线虫 daf-3、daf-9、daf-12、daf-16 基因dsRNA 的灰葡萄孢菌对松材线虫寿命的影响第105-106页
     ·喂饲表达量松材线虫 daf-3、daf-9、daf-12、daf-16 基因dsRNA 的灰葡萄孢菌对松材线虫脂肪量的影响第106-107页
   ·小结第107-110页
第六章 灰葡萄孢菌 DICER-1、DICER-2 基因同源敲除第110-120页
   ·第110-114页
     ·实验材料第110-111页
     ·实验方法第111-114页
   ·结果与分析第114-118页
     ·PKOV21-dicer1、PKOV21-dicer2 载体的构建第114-115页
     ·制备原生质体裂解液的筛选第115-116页
     ·灰葡萄孢菌同源敲除转化子鉴定第116-118页
   ·小结第118-120页
第七章 全文总结第120-124页
参考文献第124-140页
附录:松材线虫 DAF-3 基因 DNA 序列及 CDS 序列第140-144页
作者简介及在学期间所取得的科研成果第144-146页
致谢第146-147页

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