| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-14页 |
| 缩写说明 | 第14-16页 |
| 第一章 前言 | 第16-38页 |
| 第一节 昆虫蜕皮和变态的分子机制 | 第16-31页 |
| 一. 蜕皮激素信号转导 | 第16-22页 |
| 1. 蜕皮激素的合成与释放 | 第17-19页 |
| 2. 蜕皮激素的核受体 | 第19-20页 |
| 3. 蜕皮激素调控基因 | 第20-22页 |
| 二. 保幼激素信号途径 | 第22-25页 |
| 1. 保幼激素的合成与代谢 | 第22页 |
| 2. 保幼激素受体及调控基因 | 第22-25页 |
| 三. 胰岛素信号转导途径 | 第25-31页 |
| 1. 胰岛素的概述 | 第25页 |
| 2. 胰岛素的信号通路 | 第25-30页 |
| 3. 胰岛素途径与蜕皮激素通路共同调控昆虫的发育 | 第30-31页 |
| 第二节 昆虫变态时期的组织重建 | 第31-34页 |
| 一. 中肠的重建及激素调控 | 第31-33页 |
| 二. 脂肪体的重建 | 第33-34页 |
| 第三节 RabGTP酶与蛋白激酶C | 第34-37页 |
| 一. Rab蛋白 | 第34-35页 |
| 二. 蛋白激酶C | 第35-37页 |
| 第四节 本论文的科学问题研究方案与意义 | 第37-38页 |
| 第二章 Rab4b通过调节20E及insulin通路基因转录及糖原水平参与变态过程 | 第38-60页 |
| 一. 前言 | 第38-39页 |
| 二. 材料与方法 | 第39-44页 |
| 1. 材料 | 第39-40页 |
| ·实验动物 | 第39-40页 |
| ·试剂和仪器 | 第40页 |
| 2. 方法 | 第40-44页 |
| ·总RNA提取 | 第40-41页 |
| ·反转录cDNA | 第41页 |
| ·基因克隆及序列分析 | 第41页 |
| ·半定量RT-PCR | 第41-42页 |
| ·虫体RNA干扰 | 第42页 |
| ·糖原含量的测定 | 第42-43页 |
| ·细胞系干扰实验 | 第43页 |
| ·免疫细胞化学 | 第43页 |
| ·在HaEpi细胞上过表达Rab4b | 第43-44页 |
| ·激素对Rab4b的转录调控 | 第44页 |
| ·葡萄糖对Rab4b的转录调控 | 第44页 |
| 三. 实验结果 | 第44-56页 |
| 1. Rab4b的全长克隆及序列分析 | 第44-47页 |
| 2. Rab4b在棉铃虫不同组织的不同发育阶段均有转录 | 第47页 |
| 3. 虫体干扰Rab4b导致幼虫变态异常 | 第47-49页 |
| 4. 干扰Rab4b降低了虫体内糖原储存 | 第49-50页 |
| 5. 干扰Rab4b抑制了20E通路及insulin途径中的基因转录 | 第50页 |
| 6. Rab4b调控20E通路及insulin途径的基因转录 | 第50-52页 |
| 7. Rab4b参与insulin调控的FOXO细胞质定位 | 第52-54页 |
| 8. Rab4b通过不同的定位参与20E及insulin通路调控 | 第54-55页 |
| 9. Insulin促进Rab4b的转录,而20E不影响Rab4b转录 | 第55页 |
| 10. Rab4b的转录依赖于葡萄糖 | 第55-56页 |
| 四. 讨论 | 第56-58页 |
| 结论 | 第58-60页 |
| 第三章 Rab32参与棉铃虫变态期的中肠重建 | 第60-79页 |
| 一. 前言 | 第60-61页 |
| 二. 材料与方法 | 第61-67页 |
| 1. 材料 | 第61页 |
| ·实验动物 | 第61页 |
| ·试剂及仪器 | 第61页 |
| 2. 方法 | 第61-67页 |
| ·总RNA的提取 | 第61页 |
| ·反转录cDNA | 第61页 |
| ·基因克隆 | 第61-63页 |
| ·序列分析 | 第63页 |
| ·半定量RT-PCR | 第63页 |
| ·激素对Rab32转录调控 | 第63页 |
| ·重组表达及抗体制备 | 第63-65页 |
| ·免疫印迹 | 第65页 |
| ·细胞系干扰 | 第65页 |
| ·免疫组织化学 | 第65-66页 |
| ·免疫细胞化学检测Rab32的细胞内定位 | 第66页 |
| ·虫体干扰实验 | 第66-67页 |
| ·干扰Rab32后检测精巢细胞骨架 | 第67页 |
| 三. 实验结果 | 第67-77页 |
| 1. Rab32的基因克隆和序列分析 | 第67-70页 |
| 2. Rab32的重组表达及抗体特异性检测 | 第70页 |
| 3. Rab32在变态期表皮和中肠高表达 | 第70-71页 |
| 4. 20E上调Rab32的转录 | 第71-72页 |
| 5. 20E通过EcRB1上调Rab32的转录 | 第72-73页 |
| 6. 20E诱导Rab32在细胞质中聚集 | 第73-74页 |
| 7. Rab32定位于成虫中肠的上皮细胞 | 第74-75页 |
| 8. 干扰Rab32阻碍成虫中肠的形成 | 第75-77页 |
| 9. 干扰Rab32破坏精巢细胞骨架 | 第77页 |
| 四. 讨论 | 第77-78页 |
| 结论 | 第78-79页 |
| 第四章 蛋白激酶C delta参与棉铃虫变态期组织的解体 | 第79-94页 |
| 一. 前言 | 第79-80页 |
| 二. 材料与方法 | 第80-82页 |
| 1. 材料 | 第80页 |
| ·实验动物 | 第80页 |
| ·试剂和仪器 | 第80页 |
| 2. 方法 | 第80-82页 |
| ·总RNA的提取 | 第80页 |
| ·反转录cDNA | 第80页 |
| ·基因中间序列及3’端的克隆 | 第80页 |
| ·半定量RT-PCR | 第80-81页 |
| ·激素对PKCδ转录调控 | 第81页 |
| ·虫体干扰 | 第81页 |
| ·细胞系干扰实验 | 第81页 |
| ·免疫组织化学 | 第81页 |
| ·过表达实验 | 第81-82页 |
| ·免疫细胞化学 | 第82页 |
| ·重组表达及纯化 | 第82页 |
| 三. 实验结果 | 第82-92页 |
| 1. PKCδ部分cDNA序列 | 第82-85页 |
| 2. PKCδ在棉铃虫变态期高表达 | 第85-86页 |
| 3. PKCδ转录可以被20E和JHⅢ诱导上调 | 第86页 |
| 4. 20E通过EcR-B1诱导PKCδ的上调 | 第86-87页 |
| 5. 干扰PKCδ抑制凋亡阻止变态过程 | 第87-88页 |
| 6. 过表达PKCδ功能域诱导表皮细胞的凋亡 | 第88-89页 |
| 7. 过表达PKCδ功能域增强FOXO的核定位 | 第89-90页 |
| 8. 干扰PKCδ抑制USP1,Kr-H1及Calponin的转录 | 第90-91页 |
| 9. PKCδ结构域的重组表达与纯化 | 第91-92页 |
| 四. 讨论 | 第92-93页 |
| 结论 | 第93-94页 |
| 论文创新点总结与讨论 | 第94-95页 |
| 一. 本研究阐明了Rab4b在insulin与20E调控下参与棉铃虫变态过程 | 第94页 |
| 二. 本研究证明了Rab32参与变态期组织重建过程中成虫中肠的形成 | 第94页 |
| 三. 本研究发现了PKCδ在20E的调控下参与变态期组织解体 | 第94-95页 |
| 参考文献 | 第95-106页 |
| 致谢 | 第106-107页 |
| 在读期间发表论文和准备发表文章 | 第107-108页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第108页 |
