| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 本文缩略词 | 第7-12页 |
| 1 引言 | 第12-28页 |
| ·研究目的与意义 | 第12-13页 |
| ·植物多基因转化研究方法 | 第13-17页 |
| ·基因枪共转化法 | 第13-14页 |
| ·重复转化法 | 第14页 |
| ·杂交法 | 第14页 |
| ·质体转化法 | 第14-15页 |
| ·多基因单载体转化法 | 第15-17页 |
| ·Bt基因功能及在植物基因工程中的应用 | 第17-19页 |
| ·Bt基因的特性和分类 | 第17-18页 |
| ·Bt基因在植物基因工程中的应用 | 第18-19页 |
| ·甜菜碱与植物抗逆性 | 第19-21页 |
| ·甜菜碱在植物中的代谢途径 | 第19-20页 |
| ·甜菜碱合成相关酶研究进展 | 第20-21页 |
| ·Ri质粒和rol基因群研究进展 | 第21-23页 |
| ·Ri质粒结构与功能 | 第21-22页 |
| ·rol(rooting locus)基因及其编码蛋白的功能 | 第22-23页 |
| ·rolB基因在植物基因工程中的应用 | 第23页 |
| ·赤霉素与GA20-氧化酶研究进展 | 第23-25页 |
| ·研究的主要内容和技术路线 | 第25-28页 |
| 2 转rolB-pttGA20ox双价基因毛白杨生理生化特性研究 | 第28-49页 |
| ·材料与方法 | 第28-36页 |
| ·转双价基因植株分子检测 | 第28-32页 |
| ·转基因植株生根过程中内源激素含量测定 | 第32-34页 |
| ·转基因植株光合特性分析 | 第34页 |
| ·转基因植株生长测定 | 第34-35页 |
| ·转基因植株超氧化物岐化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量的测定 | 第35-36页 |
| ·统计方法 | 第36页 |
| ·结果与分析 | 第36-45页 |
| ·转rolB-pttGA20ox双价基因植株的PCR检测 | 第36页 |
| ·转rolB-pttGA20ox双价基因植株的PCR-Southem检测 | 第36-37页 |
| ·转rolB-pttGA20ox双价基因植株生根过程中内源激素的变化 | 第37-39页 |
| ·转rolB-pttGA20ox双价基因植株的光合特性分析 | 第39-42页 |
| ·转rolB-pttGA20ox双价基因植株生长测定 | 第42-43页 |
| ·转基因植株的SOD活性和MDA含量测定 | 第43-45页 |
| ·讨论 | 第45-48页 |
| ·无性繁殖阶段外源基因的遗传稳定性 | 第45页 |
| ·转基因毛白杨生根过程中内源激素含量变化 | 第45-46页 |
| ·转基因毛白杨盆栽苗光合特性的变化 | 第46页 |
| ·转基因植株的SOD活性和MDA含量变化 | 第46-47页 |
| ·转基因毛白杨盆栽期和田间生长的差异 | 第47页 |
| ·转基因毛白杨植株间的差异 | 第47-48页 |
| ·小结 | 第48-49页 |
| 3 基于Cre/LoxP重组系统的多基因表达载体构建 | 第49-70页 |
| ·材料与方法 | 第49-62页 |
| ·基因、质粒与菌株 | 第49页 |
| ·细菌培养基配方 | 第49-50页 |
| ·酶和试剂 | 第50页 |
| ·重要仪器 | 第50页 |
| ·植物表达载体pYL1305-Bt-BADH-GA20ox-rolB的构建策略 | 第50-57页 |
| ·质粒提取 | 第57页 |
| ·PCR扩增 | 第57-59页 |
| ·目的片段的纯化 | 第59-60页 |
| ·酶切反应 | 第60页 |
| ·连接反应 | 第60页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第60-61页 |
| ·连接产生转化大肠杆菌 | 第61页 |
| ·多基因组装 | 第61页 |
| ·植物表达载体转化农杆菌 | 第61-62页 |
| ·PCR鉴定目的基因及测序 | 第62页 |
| ·结果与分析 | 第62-67页 |
| ·植物表达载体pYL1305-Bt的构建 | 第62-63页 |
| ·植物表达载体pYL1305-Bt-BADH的构建 | 第63-64页 |
| ·植物表达载体pYL1305-Bt-BADH-GA20ox的构建 | 第64-66页 |
| ·植物表达载体pYL1305-Bt-BADH-GA20ox-rolB的构建 | 第66-67页 |
| ·植物表达载体pYL1305-Bt-BADH-GA20ox-rolB转化农杆菌 | 第67页 |
| ·讨论 | 第67-69页 |
| ·小结 | 第69-70页 |
| 4 农杆菌介导多基因表达载体转化烟草 | 第70-78页 |
| ·材料与方法 | 第70-72页 |
| ·植物材料 | 第70页 |
| ·质粒和菌株 | 第70页 |
| ·试剂 | 第70页 |
| ·烟草遗传转化培养基 | 第70-71页 |
| ·烟草对抗生素的敏感性试验 | 第71页 |
| ·农杆菌的活化及工程菌液的制备 | 第71页 |
| ·叶盘法遗传转化的步骤 | 第71-72页 |
| ·转基因植株的PCR扩增检测 | 第72页 |
| ·转基因植株的PCR-Southern和Southern杂交 | 第72页 |
| ·结果与分析 | 第72-75页 |
| ·潮霉素对烟草叶片分化不定芽的影响 | 第72-73页 |
| ·潮霉素对烟草生根的影响 | 第73-74页 |
| ·农杆菌介导转化与抗性筛选 | 第74页 |
| ·转多基因烟草植株的PCR检测 | 第74页 |
| ·转多基因烟草植株的PCR-Southern检测 | 第74-75页 |
| ·转多基因烟草植株的Southern检测 | 第75页 |
| ·讨论 | 第75-77页 |
| ·Hyg对烟草W38分化与生长的影响 | 第75-76页 |
| ·Hyg抗性植株的分子检测 | 第76-77页 |
| ·小结 | 第77-78页 |
| 5 转Bt-BADH-pttGA20ox-rolB多基因烟草外源基因的表达分析 | 第78-92页 |
| ·材料与方法 | 第78-83页 |
| ·试验材料 | 第78页 |
| ·半定量RT-PCR反应 | 第78-81页 |
| ·转多基因烟草植株内源激素含量的测定 | 第81页 |
| ·转多基因烟草植株的耐盐性试验 | 第81页 |
| ·转多基因烟草植株的Bt毒蛋白含量测定和抗虫试验 | 第81-82页 |
| ·转多基因烟草植株在温室中的生长测定 | 第82-83页 |
| ·结果与分析 | 第83-88页 |
| ·转多基因烟草中Bt-BADH-pttGA20ox-rolB基因的表达分析 | 第83页 |
| ·转多基因烟草植株内源激素含量分析 | 第83-85页 |
| ·转多基因烟草植株的耐盐性分析 | 第85-86页 |
| ·转多基因烟草植株的Bt毒蛋白检测和抗虫试验 | 第86-88页 |
| ·转多基因烟草植株的温室生长观测 | 第88页 |
| ·讨论 | 第88-90页 |
| ·Bt-BADH-pttGA20ox-rolB多基因在烟草中的表达 | 第88-89页 |
| ·BADH基因对转基因烟草耐盐能力的影响 | 第89-90页 |
| ·Bt基因对转基因烟草抗虫能力的影响 | 第90页 |
| ·Bt-BADH-pttGA20ox-rolB多基因对转基因烟草生长的影响 | 第90页 |
| ·小结 | 第90-92页 |
| 6 研究结论与展望 | 第92-95页 |
| ·研究结论 | 第92-94页 |
| ·展望 | 第94-95页 |
| 参考文献 | 第95-105页 |
| 图版Ⅰ | 第105-106页 |
| 图版Ⅱ | 第106-107页 |
| 图版Ⅲ | 第107-108页 |
| 图版Ⅳ | 第108-109页 |
| 个人简介 | 第109-110页 |
| 导师简介 | 第110-111页 |
| 致谢 | 第111页 |
