| 摘要 | 第1-13页 |
| Abstract | 第13-16页 |
| 1 引言 | 第16-29页 |
| ·布鲁氏菌的概况 | 第16页 |
| ·布鲁氏菌的传播与流行 | 第16-17页 |
| ·布鲁氏菌病原特性 | 第17-18页 |
| ·布鲁氏菌基因组研究概况 | 第18-19页 |
| ·布鲁氏菌的抗原和毒力因子 | 第19-25页 |
| ·主要外膜抗原 | 第19-22页 |
| ·毒力相关因子 | 第22-25页 |
| ·布鲁氏菌在巨噬细胞内的生存机制 | 第25-26页 |
| ·布鲁氏菌对巨噬细胞的侵袭作用 | 第25页 |
| ·影响布鲁氏菌侵袭作用的相关分子 | 第25页 |
| ·布鲁氏菌在巨噬细胞内的复制 | 第25-26页 |
| ·巨噬细胞的凋亡 | 第26-28页 |
| ·细胞凋亡的形态学变化 | 第26-27页 |
| ·细胞凋亡的生化特征 | 第27页 |
| ·导致巨噬细胞凋亡的因素 | 第27-28页 |
| ·研究的目的和意义 | 第28-29页 |
| 2 材料与方法 | 第29-49页 |
| ·材料 | 第29-31页 |
| ·实验动物和细胞 | 第29页 |
| ·载体、质粒及菌株 | 第29页 |
| ·引物设计 | 第29页 |
| ·工具酶 | 第29-30页 |
| ·试剂 | 第30页 |
| ·抗体 | 第30页 |
| ·主要溶液的配制 | 第30-31页 |
| ·主要仪器 | 第31页 |
| ·流产布鲁氏菌omp25原核表达与纯化及多克隆抗体的制备 | 第31-36页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第31页 |
| ·目的基因的克隆 | 第31-33页 |
| ·重组表达载体构建 | 第33-34页 |
| ·Omp25表达及纯化 | 第34-35页 |
| ·鼠源抗流产布鲁氏菌Omp25多克隆抗体的制备 | 第35-36页 |
| ·流产布鲁氏菌L7/L12小泛素化表达纯化与多克隆抗体的制备 | 第36-38页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第36页 |
| ·目的基因的克隆 | 第36页 |
| ·克隆载体的构建 | 第36页 |
| ·重组原核表达载体pET28a-SUMO-L7/L12的构建及鉴定 | 第36页 |
| ·融合蛋白的诱导表达与纯化 | 第36-37页 |
| ·U1p1蛋白酶的表达及纯化 | 第37页 |
| ·SUMO标签的切除试验 | 第37页 |
| ·兔源抗流产布鲁氏菌L7/L12多克隆抗体的制备 | 第37-38页 |
| ·流产布鲁氏菌L7/L12蛋白对T淋巴细胞增殖实验的影响及γ干扰素产生的检测· | 第38页 |
| ·淋巴细胞增殖实验 | 第38页 |
| ·γ干扰素产生的检测 | 第38页 |
| ·流产布鲁氏菌Omp25与L7/L12在昆虫细胞中的表达 | 第38-40页 |
| ·重组转移载体的构建 | 第38-39页 |
| ·重组杆粒的获得及鉴定 | 第39页 |
| ·重组杆粒DNA转染昆虫细胞 | 第39页 |
| ·重组杆状病毒DNA的PCR鉴定 | 第39-40页 |
| ·重组蛋白的表达 | 第40页 |
| ·重组蛋白的检测 | 第40页 |
| ·Omp25与L7/L12对小鼠巨噬细胞吞噬活性的影响 | 第40-42页 |
| ·Omp25对巨噬细胞吞噬活性的影响 | 第40-41页 |
| ·L7/L12蛋白对巨噬细胞吞噬活性的影响 | 第41-42页 |
| ·Omp25与L7/L12对巨噬细胞分泌细胞因子的影响 | 第42-43页 |
| ·Omp25对巨噬细胞分泌细胞因子的影响 | 第42页 |
| ·L7/L12对巨噬细胞分泌细胞因子的影响 | 第42-43页 |
| ·Omp25与L7/L12对巨噬细胞凋亡的影响 | 第43-49页 |
| ·Omp25对巨噬细胞凋亡的影响 | 第43-45页 |
| ·L7/L12对巨噬细胞凋亡的影响 | 第45-49页 |
| 3 结果与分析 | 第49-104页 |
| ·流产布鲁氏菌omp25原核表达与纯化及多克隆抗体的制备 | 第49-54页 |
| ·流产布鲁氏菌omp25基因的克隆 | 第49页 |
| ·重组克隆载体的构建 | 第49-50页 |
| ·重组原核表达载体的构建 | 第50-51页 |
| ·omp25原核表达及纯化 | 第51-53页 |
| ·鼠源抗流产布鲁氏菌Omp25多克隆抗体的制备 | 第53-54页 |
| ·流产布鲁氏菌L7/L12小泛素化表达纯化与多克隆抗体的制备 | 第54-61页 |
| ·流产布鲁氏菌L7/L12基因的克隆 | 第54页 |
| ·重组克隆载体的构建 | 第54-55页 |
| ·L7/L12原核表达载体的构建 | 第55-56页 |
| ·L7/L12表达及纯化 | 第56-58页 |
| ·U1p1蛋白酶的表达及纯化 | 第58-59页 |
| ·SUMO标签的切除试验 | 第59-60页 |
| ·L7/L12蛋白多克隆抗体的制备 | 第60-61页 |
| ·L7/L12对T淋巴细胞增殖的影响及Y干扰素产生的检测 | 第61-63页 |
| ·L7/L12对T淋巴细胞增殖的影响 | 第61-63页 |
| ·γ干扰素生成的检测 | 第63页 |
| ·流产布鲁氏菌Omp25与L7/L12在昆虫细胞中的表达 | 第63-71页 |
| ·重组转移载体的构建 | 第63-66页 |
| ·重组杆粒的获得及鉴定 | 第66页 |
| ·重组杆粒转染昆虫细胞鉴定 | 第66-68页 |
| ·重组蛋白的鉴定 | 第68-71页 |
| ·Omp25与L7/L12对小鼠巨噬细胞吞噬活性的影响 | 第71-73页 |
| ·Omp25对巨噬细胞吞噬活性的影响 | 第71-72页 |
| ·L7/L12对巨噬细胞吞噬活性的影响 | 第72-73页 |
| ·Omp25与L7/L12对巨噬细胞分泌细胞因子的影响 | 第73-86页 |
| ·Omp25对巨噬细胞分泌细胞因子的影响 | 第73-79页 |
| ·L7/L12对巨噬细胞分泌细胞因子的影响 | 第79-86页 |
| ·Omp25与L7/L12对巨噬细胞凋亡的影响 | 第86-104页 |
| ·Omp25对巨噬细胞凋亡的影响 | 第86-95页 |
| ·L7/L12对巨噬细胞凋亡的影响 | 第95-104页 |
| 4 讨论 | 第104-109页 |
| ·Omp25的原核表达 | 第104页 |
| ·L7/L12的原核表达及对T淋巴细胞增殖与IFN-γ产生的影响 | 第104-105页 |
| ·Omp25与L7/L12对巨噬细胞吞噬活性的影响 | 第105页 |
| ·细胞因子对巨噬细胞凋亡的影响 | 第105-106页 |
| ·IL-6和IL-8对巨噬细胞凋亡的影响 | 第105-106页 |
| ·IL-1β和IL-10对巨噬细胞凋亡的影响 | 第106页 |
| ·Omp25与L7/L12对巨噬细胞凋亡的影响 | 第106-109页 |
| ·Omp25与L7/L12调节TNF-α的转录对巨噬细胞凋亡的影响 | 第107页 |
| ·Omp25与L7/L12诱导caspase-3的产生对巨噬细胞凋亡的影响 | 第107页 |
| ·Omp25与L7/L12对NF-κB的激活对巨噬细胞凋亡的影响 | 第107-109页 |
| 5 结论 | 第109-110页 |
| 致谢 | 第110-111页 |
| 参考文献 | 第111-120页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第120页 |
