| 中文摘要 | 第1-9页 |
| 英文摘要 | 第9-13页 |
| 前言 | 第13-18页 |
| 材料与方法 | 第18-51页 |
| 一、材料 | 第18-31页 |
| 1.菌株与质粒 | 第18-22页 |
| 2.细胞系 | 第22页 |
| 3.脐带血 | 第22页 |
| 4.工具酶及分子量Marker | 第22页 |
| 5.主要生化试剂 | 第22-23页 |
| 6.细胞因子与荧光抗体 | 第23页 |
| 7.试剂盒 | 第23-24页 |
| 8.同位素标记化合物 | 第24页 |
| 9.引物 | 第24-30页 |
| 10.生物分析软件 | 第30-31页 |
| 11.主要的仪器及设备 | 第31页 |
| 二、实验方法 | 第31-51页 |
| 1.细胞系的培养及诱导 | 第31-32页 |
| 2.脂质体介导的真核细胞转染和稳定细胞株的筛选 | 第32-33页 |
| 3.HSC和MMP的分离及CD34+干/祖细胞体外红系培养 | 第33-35页 |
| 4.Real-time PCR检测mRNA的表达 | 第35-37页 |
| 5.K562诱导向红系、巨核系分化的检测 | 第37页 |
| 6.脂质体介导的miRNA寡核苷酸的真核细胞转染 | 第37-38页 |
| 7.miRNA的Real-time PCR检测 | 第38-39页 |
| 8.miRNA的PAGE及Northern杂交 | 第39-41页 |
| 9.miRNA相关重组质粒的构建 | 第41-44页 |
| 10.质粒DNA的小量制备 | 第44页 |
| 11.质粒DNA的大量制备及纯化 | 第44-45页 |
| 12.双萤光报告实验 | 第45-46页 |
| 13.慢病毒的构建、包装及造血干细胞的感染 | 第46-47页 |
| 14.蛋白的提取和Western blotting分析 | 第47-50页 |
| 15.K562细胞红系分化相关miRNA的Microarray分析 | 第50-51页 |
| 试验结果 | 第51-79页 |
| 一、红系分化前后miRNA差异表达分析 | 第51-62页 |
| 1.K652细胞红系和巨核系诱导分化的检测 | 第51-53页 |
| 2.细胞总RNA的提取 | 第53-54页 |
| 3.K562细胞红系分化前后miRNA的microarray分析 | 第54-57页 |
| 4.芯片结果的Northern blot验证 | 第57-59页 |
| 5.MiR-146b在K562红系和巨核系分化过程中的表达变化 | 第59-60页 |
| 6.CD34+干/祖细胞体外红系培养过程中miRNAs表达的变化 | 第60-62页 |
| 二、过表达miR-103后对K562细胞红系分化的影响 | 第62-63页 |
| 1.瞬时转染寡核苷酸miR-103前体后过表达水平确证 | 第62-63页 |
| 2.过表达miR-103能够抑制Hemin诱导的K562细胞红系分化 | 第63页 |
| 三、过表达miR-146b后对K562细胞红系和巨核系分化的影响 | 第63-68页 |
| 1.瞬时转染过表达miR-146b后对红系分化的影响 | 第63-65页 |
| 2.过表达miR-146b稳定转化子的获得 | 第65-66页 |
| 3.稳定转化子红系分化能力增加 | 第66-67页 |
| 4.过表达miR-146b后能够促进PMA诱导的K562细胞巨核系分化 | 第67-68页 |
| 四、miR-103和miR-126调节K562红系分化的分子机制 | 第68-79页 |
| 1.软件预测的靶基因结果 | 第68-69页 |
| 2.miR-103靶基因的鉴定 | 第69-73页 |
| 3.miR-126靶基因的鉴定 | 第73-79页 |
| 讨论 | 第79-89页 |
| 一、红系诱导前后差异表达miRNAs的鉴定与功能的初步分析 | 第80-84页 |
| 二、miR-103在红系分化过程中的功能及可能的机制 | 第84-85页 |
| 三、miR-146b在红系、巨核系分化过程中的功能 | 第85-86页 |
| 四、miR-126在红系分化过程中的靶基因和可能的功能作用 | 第86-89页 |
| 小结 | 第89-90页 |
| 参考文献 | 第90-95页 |
| 文献综述 | 第95-110页 |
| 英文名词及缩写 | 第110-112页 |
| 攻读博士期间发表和待发表的文章 | 第112-113页 |
| 致谢 | 第113-115页 |
