一株转IPT基因的桉树内生真菌的构建
| 中文摘要 | 第1-9页 |
| 英文摘要 | 第9-10页 |
| 1 引言 | 第10-19页 |
| ·研究的目的和意义 | 第10-11页 |
| ·国内外研究动态和趋势 | 第11-12页 |
| ·本研究课题的理论依据 | 第12-19页 |
| ·植物内生真菌 | 第12-13页 |
| ·细胞分裂素 | 第13-15页 |
| ·异戊烯基转移酶 | 第15页 |
| ·转化方法 | 第15-16页 |
| ·本实验所用的目的基因 | 第16-17页 |
| ·香菇三磷酸甘油醛脱氢酶(GPD)启动子 | 第17-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-31页 |
| ·香菇三磷酸甘油醛脱氢酶(GPD)启动子的克隆 | 第19-22页 |
| ·菌种和质粒 | 第19页 |
| ·培养基 | 第19页 |
| ·试剂 | 第19页 |
| ·常用溶液 | 第19页 |
| ·PCR引物 | 第19-20页 |
| ·香菇菌丝的培养 | 第20页 |
| ·SDS法提取香菇总 | 第20页 |
| ·香菇GPD启动子的扩增 | 第20页 |
| ·PCR产物的克隆 | 第20-22页 |
| ·异戊烯基转移酶(IPT)表达载体的构建 | 第22-25页 |
| ·菌种和质粒 | 第22页 |
| ·试剂 | 第22页 |
| ·IPT基因的PCR扩增及克隆 | 第22-23页 |
| ·IPT表达载体PL321B-IPT的构建 | 第23-24页 |
| ·质粒的大量提取与纯化 | 第24-25页 |
| ·桉树内生真菌原生质体的制备 | 第25-26页 |
| ·菌种 | 第25页 |
| ·培养基 | 第25页 |
| ·试剂 | 第25页 |
| ·菌丝的培养 | 第25页 |
| ·除草剂抗性浓度的选择 | 第25页 |
| ·原生质体的制备 | 第25-26页 |
| ·原生质体的再生 | 第26页 |
| ·原生质体的转化 | 第26-27页 |
| ·质粒 | 第26页 |
| ·试剂 | 第26页 |
| ·原生质体的PEG转化 | 第26页 |
| ·原生质体的电击转化 | 第26-27页 |
| ·转基因真菌的鉴定 | 第27-30页 |
| ·试剂 | 第27页 |
| ·PCR引物 | 第27-28页 |
| ·PCR鉴定 | 第28页 |
| ·转基因菌的除草剂抗性鉴定 | 第28页 |
| ·转基因真菌的SOUTHERN鉴定 | 第28-30页 |
| ·转基因真菌的筛选 | 第30-31页 |
| 3 结果与讨论 | 第31-42页 |
| ·香菇GPD基因启动子的克隆 | 第31-35页 |
| ·香菇GPD启动子的扩增 | 第31-34页 |
| ·PCR产物的克隆 | 第34-35页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第35页 |
| ·异戊烯基转移酶(IPT)表达载体的构建 | 第35页 |
| ·IPT表达载体PL321B-IPT的构建 | 第35页 |
| ·原生质体的制备 | 第35-36页 |
| ·菌丝的培养 | 第35页 |
| ·除草剂抗性浓度的选择 | 第35-36页 |
| ·原生质体的制备与再生 | 第36页 |
| ·原生质体的转化 | 第36-37页 |
| ·原生质体的PEG转化 | 第36-37页 |
| ·原生质体的电击转化 | 第37页 |
| ·外源基因在真菌中的表达 | 第37页 |
| ·转基因真菌的检测 | 第37-40页 |
| ·PCR鉴定 | 第38页 |
| ·转基因真菌的除草剂抗性鉴定 | 第38-39页 |
| ·转基因真菌的SOUTHERN鉴定 | 第39-40页 |
| ·转基因真菌的筛选 | 第40-42页 |
| 4 结论 | 第42-43页 |
| 致谢 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-47页 |
| 附录 | 第47-61页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第61页 |
