| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 前言 | 第9-28页 |
| 1 杆状病毒简介 | 第9-12页 |
| ·杆状病毒的分类 | 第9-10页 |
| ·杆状病毒的结构 | 第10-11页 |
| ·杆状病毒的生活史 | 第11-12页 |
| ·杆状病毒的复制过程 | 第12页 |
| 2 杆状病毒的分子生物学特性 | 第12-17页 |
| ·杆状病毒的基因组特征 | 第12-13页 |
| ·杆状病毒的结构蛋白基因 | 第13-14页 |
| ·杆状病毒基因的保守基因 | 第14-17页 |
| 3 杆状病毒功能基因组学研究的方法 | 第17-20页 |
| ·基因的功能预测 | 第18页 |
| ·通过基因表达产物的定位来获得基因的功能信息 | 第18页 |
| ·利用基因突变分析研究杆状病毒基因的功能 | 第18-19页 |
| ·基因的超量表达功能分析 | 第19-20页 |
| 4 杆状病毒的应用 | 第20-22页 |
| ·杆状病毒作为载体表达系统 | 第20-21页 |
| ·重组杆状病毒杀虫剂 | 第21页 |
| ·杆状病毒与基因治疗 | 第21页 |
| ·杆状病毒与表面展示 | 第21-22页 |
| 5 本实验的研究背景、目的和意义 | 第22-28页 |
| ·研究背景 | 第22-26页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第26-28页 |
| 第一章 HaSNPV orf44基因的克隆表达及抗体制备 | 第28-37页 |
| 引言 | 第28页 |
| 1 材料 | 第28-29页 |
| ·实验材料 | 第28页 |
| ·酶、化学试剂和试剂盒 | 第28-29页 |
| ·主要仪器 | 第29页 |
| 2 方法 | 第29-34页 |
| ·HaSNPV多角体的提取 | 第29页 |
| ·HaSNPV基因组的提取 | 第29页 |
| ·HaSNPV orf44基因的扩增、克隆与测序 | 第29-30页 |
| ·HaSNPV orf44基因的亚克隆及阳性重组子的鉴定 | 第30页 |
| ·电转化感受态细胞的制备 | 第30页 |
| ·电转化、涂布及培养 | 第30-31页 |
| ·大肠杆菌中质粒的提取方法 | 第31页 |
| ·目的基因的原核表达及SDS-PAGE分析 | 第31-32页 |
| ·原核表达蛋白质的纯化 | 第32页 |
| ·orf44蛋白的抗血清制备 | 第32-33页 |
| ·Western杂交 | 第33-34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-35页 |
| ·orf44基因的克隆及重组表达载体的酶切鉴定 | 第34页 |
| ·重组表达载体的诱导表达和SDS-PAGE分析 | 第34-35页 |
| ·orf44蛋白抗血清的制备及Western-blot检测 | 第35页 |
| 4 讨论 | 第35-37页 |
| 第二章 HaSNPV Ha44的亚细胞定位 | 第37-46页 |
| 引言 | 第37页 |
| 1 材料 | 第37-38页 |
| ·实验材料 | 第37页 |
| ·酶、化学试剂和试剂盒 | 第37-38页 |
| ·主要仪器 | 第38页 |
| 2 方法 | 第38-41页 |
| ·pIZ/V5-egfp重组载体的构建 | 第38页 |
| ·pIZ/V5-egfp/orf44重组载体的构建 | 第38页 |
| ·pIZ/V_5-egfp/orf44质粒的提取 | 第38-41页 |
| ·细胞培养及质粒转染 | 第41页 |
| ·转染后细胞表达观察 | 第41页 |
| 3 结果 | 第41-44页 |
| ·pIZ/V5-egfp重组质粒的构建 | 第41页 |
| ·pIZ/V5-egfp/orf44重组质粒的构建 | 第41-42页 |
| ·荧光显微镜观察结果 | 第42-43页 |
| ·激光扫描共聚焦显微镜观察结果 | 第43-44页 |
| 4 讨论 | 第44-46页 |
| 第三章 HaSNPV G4株orf44缺失重组病毒的构建 | 第46-54页 |
| 引言 | 第46页 |
| 1 材料 | 第46-48页 |
| ·实验材料 | 第46-47页 |
| ·酶、化学试剂和试剂盒 | 第47-48页 |
| ·主要仪器 | 第48页 |
| 2 方法 | 第48-49页 |
| ·含有50bp左右orf44同源臂的P_(hsp70)-Cm~r线性片段的获得 | 第48页 |
| ·含有HaBacHZ8和λ噬菌体Red重组酶的感受态细胞的制备 | 第48页 |
| ·orf44基因的缺失 | 第48-49页 |
| ·大肠杆菌中Bacmid的提取法 | 第49页 |
| ·重组子的鉴定 | 第49页 |
| 3 结果与分析 | 第49-52页 |
| ·orf44基因缺失型重组病毒的构建 | 第49-51页 |
| ·重组病毒的鉴定 | 第51-52页 |
| 4 讨论 | 第52-54页 |
| 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
