| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-15页 |
| 1 引言 | 第15-43页 |
| ·绵羊肺腺瘤病概述 | 第15-36页 |
| ·绵羊肺腺瘤病的发现 | 第15页 |
| ·绵羊肺腺瘤病的病原学 | 第15-26页 |
| ·绵羊肺腺瘤病的流行病学 | 第26-28页 |
| ·绵羊肺腺瘤病的发病机理 | 第28-31页 |
| ·绵羊肺腺瘤病的临床症状与病理变化 | 第31-33页 |
| ·绵羊肺腺瘤病的诊断 | 第33-34页 |
| ·绵羊肺腺瘤病的防制 | 第34-35页 |
| ·绵羊肺腺瘤与人的细支气管肺泡癌 | 第35-36页 |
| ·绵羊肺腺瘤病的病理学研究进展 | 第36页 |
| ·单克隆抗体技术 | 第36-37页 |
| ·单克隆抗体的特点 | 第36-37页 |
| ·单克隆抗体技术的应用 | 第37页 |
| ·实时荧光定量PCR 技术 | 第37-41页 |
| ·实时荧光定量PCR技术的概述和基本原理 | 第37-41页 |
| ·实时荧光定量PCR技术的应用 | 第41页 |
| ·实时荧光定量PCR技术的局限性 | 第41页 |
| ·本研究的目标及意义 | 第41-43页 |
| 2 实验一 JSRV-NM 株env 基因和gag 基因的克隆及其序列分析 | 第43-55页 |
| 摘要 | 第43-44页 |
| ·材料 | 第44-45页 |
| ·绵羊肺腺瘤病自然病例肺肿瘤组织 | 第44页 |
| ·菌株与质粒 | 第44-45页 |
| ·主要试剂 | 第45页 |
| ·主要仪器 | 第45页 |
| ·方法 | 第45-48页 |
| ·绵羊肺腺瘤病自然病例肺肿瘤组织基因组DNA 的提取 | 第45-46页 |
| ·引物的设计与合成 | 第46页 |
| ·目的基因的PCR扩增 | 第46-47页 |
| ·目的基因的T-A 克隆 | 第47-48页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第48页 |
| ·序列分析 | 第48页 |
| ·保存菌种 | 第48页 |
| ·结果 | 第48-51页 |
| ·绵羊肺腺瘤病自然病例肺肿瘤组织基因组DNA 的提取 | 第48-49页 |
| ·目的基因PCR 扩增结果 | 第49页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第49-51页 |
| ·讨论 | 第51-55页 |
| 3 实验二 JSRV-NM 株env 基因和gag 基因的表达 | 第55-75页 |
| 摘要 | 第55-56页 |
| ·材料 | 第56-59页 |
| ·菌株与质粒 | 第56-58页 |
| ·转染细胞 | 第58页 |
| ·抗体 | 第58页 |
| ·培养基 | 第58页 |
| ·主要试剂 | 第58页 |
| ·主要仪器 | 第58-59页 |
| ·方法 | 第59-64页 |
| ·重组原核表达载体的构建 | 第59-60页 |
| ·重组表达载体在E.coli 中的表达及表达条件的优化 | 第60页 |
| ·融合表达蛋白的分析 | 第60页 |
| ·可溶性表达蛋白的纯化 | 第60页 |
| ·从包涵体中纯化表达蛋白 | 第60-61页 |
| ·重组真核表达载体的构建 | 第61-62页 |
| ·pCDNA3.1(+)-CA-HA 在真核细胞中的瞬时表达 | 第62-64页 |
| ·结果 | 第64-72页 |
| ·重组原核表达载体的构建 | 第64-65页 |
| ·重组表达载体在E.coli 中的表达 | 第65-68页 |
| ·重组真核表达载体的构建 | 第68-70页 |
| ·检测pCDNA3.1(+)-CA-HA 在真核细胞中的瞬时表达 | 第70-72页 |
| ·讨论 | 第72-75页 |
| 4 实验三JSRV-NM 株衣壳蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立 | 第75-89页 |
| 摘要 | 第75-76页 |
| ·材料 | 第76-77页 |
| ·抗原、细胞与实验动物 | 第76页 |
| ·主要试剂 | 第76页 |
| ·主要仪器 | 第76-77页 |
| ·方法 | 第77-84页 |
| ·免疫动物 | 第77页 |
| ·免疫小鼠效价测定 | 第77页 |
| ·饲养细胞的制备 | 第77-78页 |
| ·杂交瘤细胞系的建立及其鉴定 | 第78-84页 |
| ·结果 | 第84-87页 |
| ·杂交瘤细胞系的建立及鉴定 | 第84-87页 |
| ·杂交瘤细胞稳定性测定 | 第87页 |
| ·讨论 | 第87-89页 |
| 5 实验四绵羊肺腺瘤病毒内蒙毒株荧光定量PCR 检测方法的建立 | 第89-103页 |
| 摘要 | 第89-90页 |
| ·材料 | 第90-91页 |
| ·试验动物 | 第90-91页 |
| ·病料 | 第91页 |
| ·主要试剂 | 第91页 |
| ·菌株与质粒 | 第91页 |
| ·主要仪器 | 第91页 |
| ·方法 | 第91-96页 |
| ·外周血白细胞的制备 | 第91-92页 |
| ·基因组DNA 的提取 | 第92-93页 |
| ·靶序列的选择 | 第93页 |
| ·引物和探针的设计 | 第93页 |
| ·标准曲线的制作 | 第93-95页 |
| ·实时荧光定量检测方法的重复性及敏感性试验 | 第95页 |
| ·样品检测 | 第95-96页 |
| ·结果 | 第96-100页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第96页 |
| ·目的基因的PCR 扩增结果 | 第96页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第96-97页 |
| ·测序分析 | 第97页 |
| ·标准曲线的制作 | 第97-98页 |
| ·实时荧光定量PCR 检测方法的重复性及敏感性试验结果 | 第98页 |
| ·JSRV 前病毒 DNA 检测结果 | 第98-100页 |
| ·讨论 | 第100-103页 |
| 6 总体结论 | 第103-105页 |
| 7 本研究的创新点 | 第105-106页 |
| 致谢 | 第106-107页 |
| 参考文献 | 第107-123页 |
| 作者简介 | 第123页 |
