| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-34页 |
| ·植物衰老概述 | 第13-18页 |
| ·植物衰老与程序性细胞死亡 | 第13-15页 |
| ·植物衰老与物质代谢 | 第15页 |
| ·影响衰老的因素 | 第15-17页 |
| ·一些与衰老的的基因 | 第17-18页 |
| ·cDNA文库的构建的方法 | 第18-24页 |
| ·一般cDNA文库的构建 | 第18-20页 |
| ·总RNA和mRNA的提取 | 第19页 |
| ·cDNA的合成 | 第19页 |
| ·载体的选择 | 第19-20页 |
| ·双链cDNA的充隆 | 第20页 |
| ·cDNA全长文库的构建方法 | 第20-23页 |
| ·CAPture法 | 第21-22页 |
| ·Oligo-capping法 | 第22页 |
| ·SMART法 | 第22-23页 |
| ·Cap-trapper法 | 第23页 |
| ·Cap-jumping法 | 第23页 |
| ·mRNA差减/均一化全长cDNA文库 | 第23页 |
| ·cDNA文库的应用与筛选 | 第23-24页 |
| ·杂交筛选法 | 第24页 |
| ·差异杂文筛选法 | 第24页 |
| ·免疫筛选法 | 第24页 |
| ·PCR法 | 第24页 |
| ·蛋白质组学研究概述 | 第24-34页 |
| ·蛋白质组学的产生背景 | 第24-25页 |
| ·蛋白质组学的研究意义 | 第25-26页 |
| ·蛋白质组学概念及研究内容 | 第26-27页 |
| ·蛋白质组学研究技术 | 第27-32页 |
| ·蛋白质组学在基础生物学和应用生物学中的应用 | 第32-34页 |
| 第二章 与衰老相关基因eIF5A的研究 | 第34-56页 |
| ·前言 | 第34-35页 |
| ·材料和方法 | 第35-39页 |
| ·材料 | 第35页 |
| ·RNA提取和5’,3’-RACE | 第35-36页 |
| ·DNA的提取和PCR扩增 | 第36-37页 |
| ·PCR扩增产物的回收、克隆、测序 | 第37页 |
| ·序列分析及蛋白三级结构预测 | 第37-38页 |
| ·半定量RT-PCR | 第38页 |
| ·pET28a(+)-eIF5A表达载体的构建 | 第38页 |
| ·转化及重组质粒的鉴定 | 第38-39页 |
| ·重组质粒的诱导表达及SDS-PAGE分析 | 第39页 |
| ·Western blot分析 | 第39页 |
| ·结果与分析 | 第39-51页 |
| ·小麦eIF5A基因cDNA的分离和序列分析 | 第39-41页 |
| ·小麦及其近缘属种的eIF5A基因DNA的分离和序列分析 | 第41-43页 |
| ·eIF5A基因的进化分析 | 第43-46页 |
| ·植物eIF5A基因的组织结构分析 | 第46-47页 |
| ·小麦eIF5A基因的三级结构 | 第47页 |
| ·半定量RT-PCR | 第47-48页 |
| ·eIF5A基因在染色体上的定位 | 第48页 |
| ·pET28a(+)-eIF5A表达载体的构建与鉴定 | 第48-50页 |
| ·小麦eIF5A蛋白的体外表达 | 第50页 |
| ·Western blot分析 | 第50-51页 |
| ·讨论 | 第51-56页 |
| ·eIF5A基因的保守性及其多种异构体的普遍存在 | 第51-52页 |
| ·eIF5A基因的进化 | 第52-54页 |
| ·10个小麦族物种的进化 | 第54页 |
| ·小麦eIF5A基因的物理定位 | 第54-55页 |
| ·TaeIF5A-1的组织表达特性 | 第55-56页 |
| 第三章 与衰老相关基因GcB5的研究 | 第56-98页 |
| ·前言 | 第56-57页 |
| ·材料与方法 | 第57-65页 |
| ·利用改进的Oligo-capping法构建手掌参全长cDNA文库 | 第57-59页 |
| ·手掌参总RNA的提取及mRNA的纯化 | 第57-58页 |
| ·mRNA的5’端寡核苷酸"戴帽" | 第58页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第58页 |
| ·cDNA的扩增 | 第58页 |
| ·cDNA文库的构建及鉴定 | 第58-59页 |
| ·重组克隆的测序及同源性分析 | 第59页 |
| ·手掌参与衰老相关基因YLS7分离和序列分析 | 第59页 |
| ·原核表达载体pET28a:GcB5的构建 | 第59-60页 |
| ·E.coli平板生长检测 | 第60页 |
| ·E.coli的培养和生长测定 | 第60页 |
| ·SDS-PAGE | 第60-61页 |
| ·双向电泳 | 第61-62页 |
| ·蛋白质的酶解 | 第62页 |
| ·MALDI-Q-TOF串联质谱鉴定蛋白 | 第62页 |
| ·蛋白鉴定和数据库搜索 | 第62-63页 |
| ·半定量RT-PCR | 第63-65页 |
| ·结果与分析 | 第65-94页 |
| ·手掌参总RNA的提取及mRNA的纯化 | 第65页 |
| ·cDNA质粒文库的构建及质量鉴定 | 第65-66页 |
| ·与衰老相关基因GcB5的分离和分析 | 第66-70页 |
| ·GcB5对细菌生长的影响 | 第70-72页 |
| ·在GcB5诱导表达下的细菌双向电泳结果 | 第72-73页 |
| ·MALDI-TOF MS/MS鉴定蛋白及数据搜索结果 | 第73-84页 |
| ·差异表达蛋白的分类 | 第84-87页 |
| ·用半定量RT-PCR验证部分基因的表达特性 | 第87-94页 |
| ·讨论 | 第94-98页 |
| ·Oligo-capping法构建cDNA文库方法的改进和评价 | 第94-95页 |
| ·在叶片衰老基因诱导下的大肠杆菌蛋白质组的差异性 | 第95-98页 |
| 第四章 论文总结 | 第98-99页 |
| 参考文献 | 第99-114页 |
| 致谢 | 第114-115页 |
| 博士期间已发表和待发表论文 | 第115-116页 |
