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内源性绵羊肺腺瘤env基因的克隆和原核表达

摘要第1-4页
Abstract第4-9页
综述部分第9-19页
 1 绵羊肺腺瘤病概述第9-13页
   ·流行病学第9-10页
   ·病原学第10-11页
   ·发病机理第11页
   ·临床症状与病理变化第11-12页
   ·诊断与防制第12-13页
 2 绵羊肺腺瘤病毒(JSRV)的概述第13-17页
   ·JSRV 的分类第13页
   ·JSRV 的理化性质与细胞嗜性第13页
   ·JSRV 的受体第13-14页
   ·JSRV 的基因组结构第14页
   ·JSRV 在绵羊肺腺瘤病中的表现形式第14-15页
   ·enJSRV 与exJSRV 基因结构及编码蛋白的异同第15-17页
 3 enJSRV 在OPA 中的作用第17-18页
 4 本研究的目的及意义第18-19页
实验部分第19-44页
 试验一 内源性绵羊肺腺瘤病毒env 基因的克隆及序列分析第19-29页
   ·材料第19-20页
   ·方法第20-24页
     ·正常绵羊肺脏组织基因组 DNA 的提取第20-21页
     ·设计并合成引物第21页
     ·内源性env 基因的 PCR 扩增第21-22页
     ·内源性env 基因在pMD18-T 载体上的克隆第22-23页
     ·应用生物学软件对内源性env 基因进行序列分析第23页
     ·保存菌种第23-24页
   ·结果第24-27页
     ·PCR 扩增结果第24页
     ·PMD18-T-env 重组质粒的酶切鉴定第24-25页
     ·内源性env 基因序列分析第25-27页
   ·讨论第27-28页
   ·小结第28-29页
 试验二 内源性绵羊肺腺瘤病毒env 基因的原核表达第29-40页
   ·材料第29-30页
   ·方法第30-33页
     ·内源性env 基因原核表达载体pET-32a 的提取第30-31页
     ·含有重组质粒pMD18-T-env 的菌株复活第31页
     ·重组质粒pMD18-T-env 酶切第31页
     ·内源性env 基因原核表达载体pET-32a 线性化第31页
     ·pET-32a 与内源性env 基因连接第31页
     ·重组质粒pET-32a-env 的转化第31-32页
     ·重组质粒pET-32a-env 的鉴定第32页
     ·诱导表达重组菌pET-32a-env第32-33页
   ·结果第33-36页
     ·内源性env 基因原核表达载体pET-32a 的提取结果第33页
     ·菌液PCR 鉴定pET-32a-env 结果第33-34页
     ·酶切鉴定pET-32a-env 结果第34页
     ·重组蛋白表达条件的优化结果第34-36页
   ·讨论第36-38页
   ·小结第38-40页
 试验三 内源性env 基因编码表达的蛋白Western Blot 检测和包涵体纯化第40-44页
   ·材料第40页
   ·方法第40-42页
     ·内源性env 基因编码表达的蛋白Western Blot 检测第40-41页
     ·内源性env 基因编码表达的蛋白包涵体纯化第41-42页
   ·结果第42-43页
     ·内源性env 基因编码表达的蛋白Western Blot 检测结果第42页
     ·内源性env 基因编码表达的蛋白包涵体纯化结果第42-43页
   ·讨论第43页
   ·小结第43-44页
全文结论第44-45页
致谢第45-46页
参考文献第46-51页
作者简介第51页

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