| 摘要 | 第1-3页 |
| SUMMARY | 第3-6页 |
| 第一部分 文献综述 | 第6-18页 |
| 1 口蹄疫病毒概况 | 第6页 |
| 2 FMDV基因组VPg、非转录区、Poly(A)尾巴及其功能 | 第6-8页 |
| ·5′非转录区 | 第7页 |
| ·3′非转录区 | 第7页 |
| ·Poly(A)尾巴 | 第7-8页 |
| 3 FMDV基因组的开放阅读框(ORF)及其功能 | 第8-9页 |
| ·P1基因及其编码产物的功能 | 第8页 |
| ·非结构蛋白编码区及其产物的功能 | 第8-9页 |
| 4 DNA疫苗及自杀式DNA疫苗概述 | 第9-13页 |
| ·核酸疫苗的特点 | 第10-11页 |
| ·自杀式疫苗的特点 | 第11页 |
| ·核酸疫苗和自杀式DNA疫苗的免疫机理 | 第11-13页 |
| 5 免疫佐剂及注射方式在DNA疫苗中的作用 | 第13-18页 |
| ·细胞因子佐剂 | 第13-14页 |
| ·趋化因子和协同刺激分子佐剂 | 第14页 |
| ·补体分子佐剂 | 第14页 |
| ·4CpG DNA(ODN)佐剂 | 第14-15页 |
| ·注射方式、剂量对DNA疫苗免疫效果的影响 | 第15页 |
| ·口蹄疫DNA疫苗研究概述 | 第15-18页 |
| 第二部分 研究报告 | 第18-40页 |
| 前言 | 第18-20页 |
| 第一章 口蹄疫病毒ASIAI型P12A、3C基因的克隆与序列分析 | 第20-29页 |
| 1 材料与仪器 | 第20-21页 |
| ·材料 | 第20页 |
| ·仪器与设备 | 第20-21页 |
| 2 方法 | 第21-25页 |
| ·病毒RNA的提取 | 第21页 |
| ·病毒RNA的反转录(reverse transcription) | 第21-22页 |
| ·病毒cDNA的PCR扩增(polymerase chain reaction,PCR) | 第22页 |
| ·PCR产物的纯化、回收 | 第22-23页 |
| ·PCR纯化产物与pMD18-T载体连接 | 第23页 |
| ·感受态细菌的制备 | 第23页 |
| ·转化感受态细胞 | 第23-24页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第24-25页 |
| ·重组质粒pMD-P12A和pMD-3C的鉴定 | 第25页 |
| 3 结果 | 第25-28页 |
| ·FMDV P12A、3C基因RT-PCR产物的电泳结果 | 第25-26页 |
| ·pMD-P12A PCR、酶切鉴定结果 | 第26页 |
| ·pMD-3C PCR、酶切鉴定结果 | 第26-27页 |
| ·序列分析结果 | 第27-28页 |
| 4 讨论 | 第28-29页 |
| 第二章 口蹄疫病毒ASIAI型P12A3C基因自杀式真核表达载体的构建 | 第29-40页 |
| 1 材料与仪器 | 第29页 |
| ·材料 | 第29页 |
| ·引物 | 第29页 |
| ·仪器设备 | 第29页 |
| 2 方法 | 第29-35页 |
| ·重组载体PMD-P12A3C的构建 | 第29-30页 |
| ·重组质粒pMD-P12A3C的构建 | 第30-32页 |
| ·重组真核表达载体pshame2a-P12A3C的构建 | 第32-33页 |
| ·重组质粒在BHK-21细胞中的表达 | 第33-35页 |
| 3 结果 | 第35-38页 |
| ·P12A,3C基因PCR产物的电泳结果 | 第35页 |
| ·PMD-P12APCR和酶切鉴定 | 第35-36页 |
| ·PMD-3C PCR和酶切鉴定 | 第36页 |
| ·PMD-P12A3CPCR和酶切鉴定 | 第36-37页 |
| ·pshame2α-P12A3C鉴定结果 | 第37页 |
| ·间接免疫荧光检测结果 | 第37-38页 |
| ·ELISA检测结果 | 第38页 |
| 4 结论与讨论 | 第38-40页 |
| ·讨论 | 第38-39页 |
| ·结论 | 第39-40页 |
| 致谢 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-47页 |
| 作者简介 | 第47-48页 |
| 导师简介 | 第48-49页 |
