| 中文摘要 | 第1-9页 |
| 英文摘要 | 第9-11页 |
| 1 引言 | 第11-15页 |
| ·目的与意义 | 第11-12页 |
| ·研究背景 | 第12-14页 |
| ·天然珍惜抗癌植物红豆杉及其内生真菌 | 第12-13页 |
| ·红豆杉及其内生真菌产紫杉醇相关基因的遗传学起源 | 第13页 |
| ·转基因的国内外研究进展 | 第13页 |
| ·透明颤菌血红蛋白 VHB 基因 | 第13-14页 |
| ·目前国内外对紫杉醇产生菌的改良 | 第14页 |
| ·工作研究进展 | 第14-15页 |
| 2 材料与方法 | 第15-27页 |
| ·材料 | 第15-18页 |
| ·实验材料 | 第15-16页 |
| ·仪器 | 第16页 |
| ·主要试剂和药品 | 第16页 |
| ·PCR 引物及测序 | 第16-17页 |
| ·所用的几种培养基的成分 | 第17-18页 |
| ·红豆杉内生真菌的分离与纯化实验方法 | 第18页 |
| ·内生真菌的分离 | 第18页 |
| ·内生真菌的纯化 | 第18页 |
| ·产紫杉醇内生真菌的鉴定实验方法 | 第18-20页 |
| ·菌株的发酵培养 | 第19页 |
| ·发酵产物的萃取 | 第19页 |
| ·用 TLC 薄层层析方法对产紫杉醇内生真菌进行初步筛选 | 第19页 |
| ·HPLC 高效液相色谱方法对产紫杉醇内生真菌进行鉴定 | 第19-20页 |
| ·克隆试验方法 | 第20-24页 |
| ·PCR 扩增 | 第20-21页 |
| ·连接反应 | 第21-22页 |
| ·大肠杆菌热激感受态细胞的制备 | 第22页 |
| ·重组子转化大肠杆菌(热激法转化) | 第22-23页 |
| ·大肠杆菌中质粒 DNA 的小量提取（碱裂解法） | 第23-24页 |
| ·遗传学基础讨论试验方法 | 第24-25页 |
| ·质粒的大量提取 | 第24页 |
| ·质粒的纯化 | 第24页 |
| ·真菌 DNA 的提取 | 第24-25页 |
| ·植物 DNA 的提取(SDS 法改进) | 第25页 |
| ·基因改良试验方法 | 第25-27页 |
| ·菌丝的培养 | 第25页 |
| ·真菌对除草剂的抗性 | 第25页 |
| ·真菌原生质体的制备 | 第25-26页 |
| ·原生质体的再生 | 第26页 |
| ·转基因真菌 GUS 活性检测 | 第26-27页 |
| 3 结果与分析 | 第27-42页 |
| ·红豆杉内生真菌的分离与纯化 | 第27页 |
| ·产紫杉醇内生真菌的鉴定 | 第27-35页 |
| ·三株产紫杉醇的真菌形态 | 第27-28页 |
| ·TLC 薄层层析方法对产紫杉醇内生真菌进行初步筛选 | 第28-29页 |
| ·HPLC 高效液相色谱方法对产紫杉醇内生真菌进行鉴定 | 第29-30页 |
| ·PCR（1851DNA）辅助方法对产紫杉醇内生真菌的初步分类 | 第30-31页 |
| ·三种真菌1851DNABLAST 比对结果 | 第31-35页 |
| ·红豆杉内生真菌产紫杉醇相关基因 BAPT 的鉴定及初步研究 | 第35-39页 |
| ·PCR（BAPT）产紫杉醇相关基因 | 第35-36页 |
| ·三种真菌与其宿主红豆杉基因同源性分析 | 第36-39页 |
| ·电转化对真菌的基因改良 | 第39-42页 |
| ·除草剂抗性浓度的选择 | 第39页 |
| ·电转化阳性菌株与负对照 | 第39-40页 |
| ·转基因真菌的GUS 活性表达 | 第40页 |
| ·PCR（VHB）对电转化阳性菌株进行检测 | 第40页 |
| ·转基因真菌与野生型真菌在限氧条件下的生长情况 | 第40-42页 |
| 4 讨论 | 第42-44页 |
| 5 结论 | 第44-46页 |
| ·红豆杉内生真菌的分离与纯化 | 第44页 |
| ·产紫杉醇内生真菌的鉴定 | 第44页 |
| ·产紫杉醇内生真菌的鉴定，获得及对真菌的分类学研究 | 第44页 |
| ·红豆杉内生真菌产紫杉醇相关基因BAPT 的鉴定及初步研究 | 第44-45页 |
| ·改进的SDS 法 | 第44-45页 |
| ·遗传学起源 | 第45页 |
| ·一种快速经济的鉴定产紫杉醇真菌的辅助方法 | 第45页 |
| ·电转化对真菌的基因改良 | 第45-46页 |
| 致谢 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-51页 |
| 附录 | 第51-52页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第52页 |
