| 摘要 | 第1-13页 |
| Abstract | 第13-15页 |
| 缩略词表（Abbreviations) | 第15-17页 |
| 主要繁殖性状的中英文对照和缩略词 | 第17-18页 |
| 1 前言 | 第18-44页 |
| ·研究问题的由来 | 第18-19页 |
| ·文献综述 | 第19-43页 |
| ·影响猪产仔数的主要组分性状及猪子宫内膜结构 | 第19-21页 |
| ·猪子宫内膜结构 | 第19页 |
| ·影响猪产仔数的主要组分性状 | 第19-21页 |
| ·胚胎早期发育与胚胎附植 | 第21-26页 |
| ·胚胎早期发育 | 第21-22页 |
| ·母体妊娠识别与母胎免疫 | 第22-23页 |
| ·实现胚胎附植的三个阶段 | 第23-26页 |
| ·影响胚胎附植的相关基因HOXA10研究现状与不足 | 第26-38页 |
| ·同源框基因(Homeobox,HOX)家族与雌性发育 | 第27-28页 |
| ·HOXA10基因的结构与其在子宫内膜中的表达 | 第28-29页 |
| ·HOXA10基因与雌性生殖相关的功能 | 第29-32页 |
| ·HOXA10基因表达的调节因素 | 第32-34页 |
| ·HOXA10基因对靶基因的调控 | 第34-37页 |
| ·猪HOXA10基因研究进展 | 第37-38页 |
| ·转基因动物应用的现状与不足 | 第38-43页 |
| ·转基因猪应用的几个方面 | 第39-40页 |
| ·利用转基因猪研究的基因表达调控与功能 | 第40页 |
| ·利用转基因动物技术改良猪繁殖性状研究进展与不足 | 第40页 |
| ·显微注射法制备转基因动物 | 第40-41页 |
| ·转基因载体的构成 | 第41-42页 |
| ·转基因重组载体启动子选择 | 第42-43页 |
| ·转基因动物研究的不足与发展前景 | 第43页 |
| ·本研究的目的 | 第43-44页 |
| 2. 材料和方法 | 第44-75页 |
| ·材料 | 第44-54页 |
| ·组织样品 | 第44页 |
| ·cDNA和DNA样品 | 第44-45页 |
| ·细胞样品 | 第45页 |
| ·载体及菌株 | 第45-48页 |
| ·主要试剂配制与试剂盒 | 第48-51页 |
| ·分子生物学主要试剂及引物合成与测序 | 第48-49页 |
| ·细胞培养所用主要试剂 | 第49页 |
| ·转基因动物检测用主要试剂配制 | 第49-50页 |
| ·其它实验用生化试剂与配制 | 第50-51页 |
| ·主要试剂盒 | 第51页 |
| ·主要仪器与设备 | 第51-52页 |
| ·主要分子生物学软件及数据库 | 第52-54页 |
| ·主要生物学软件 | 第52-53页 |
| ·主要数据库与网站 | 第53-54页 |
| ·研究方法 | 第54-75页 |
| ·本研究技术路线 | 第54页 |
| ·目的基因的分离与克隆 | 第54-56页 |
| ·目的基因cDNA的电子克隆 | 第54-56页 |
| ·序列的同源性分析与鉴定 | 第56页 |
| ·引物的设计 | 第56页 |
| ·PCR扩增的条件 | 第56页 |
| ·PCR产物的纯化回收和克隆测序 | 第56-58页 |
| ·目的基因的分型与关联分析 | 第58页 |
| ·PCR-RFLP方法检测目的基因多态位点 | 第58页 |
| ·猪基因与性状关联分析 | 第58页 |
| ·目的基因的组织表达谱分析 | 第58-59页 |
| ·组织性RNA的提取 | 第58-59页 |
| ·总RNA的完整性检测 | 第59页 |
| ·总RNA的反转录 | 第59页 |
| ·引物设计与扩增条件 | 第59页 |
| ·目的基因在梅山和大白猪不同妊娠阶段子宫内膜中的定量表达分析 | 第59-60页 |
| ·子宫内膜组织总RNA提取及cDNA的合成 | 第59页 |
| ·SYBR green Real-time PCR的引物设计 | 第59页 |
| ·SYBR green Real-time PCR的反应条件 | 第59-60页 |
| ·定量PCR数据分析 | 第60页 |
| ·孕激素诱导小鼠目的基因的表达检测与胚胎着床 | 第60-61页 |
| ·妊娠小鼠的孕酮注射 | 第60页 |
| ·小鼠子宫内膜胚胎着床数观测 | 第60页 |
| ·小鼠子宫内膜获得 | 第60-61页 |
| ·小鼠子宫内膜目的基因定量表达检测 | 第61页 |
| ·目的基因启动子片段的克隆和预测 | 第61-63页 |
| ·目的基因启动子片段的克隆 | 第61页 |
| ·启动子的转录因子结合位点预测 | 第61页 |
| ·猪HOXA10基因启动子报告基因载体构建 | 第61-62页 |
| ·Ishikawa细胞培养、转染及雌激素刺激 | 第62-63页 |
| ·目的基因雌激素诱导启动子重组载体构建及Ishikawa细胞验证 | 第63-65页 |
| ·目的基因雌激素诱导启动子重组质粒构建 | 第63-64页 |
| ·Ishikawa细胞转染与雌激素(E_2)和孕激素(P_4)处理 | 第64页 |
| ·激素诱导后目的基因荧光定量表达分析 | 第64-65页 |
| ·显微注射法制备激素诱导型转猪HOXA10基因小鼠 | 第65-68页 |
| ·注射用DNA的制备及纯化 | 第65页 |
| ·显微注射法制备转基因小鼠 | 第65-68页 |
| ·转基因小鼠的检测 | 第68-71页 |
| ·转基因小鼠基因组DNA制备 | 第68-69页 |
| ·转基因小鼠的PCR鉴定 | 第69页 |
| ·Southern杂交(同位素标记探针)鉴定转基因小鼠 | 第69-71页 |
| ·转基因小鼠RT-PCR分析 | 第71页 |
| ·激素诱导型转HOXA10基因猪的制备与鉴定 | 第71-75页 |
| ·实验用猪的选择 | 第71-72页 |
| ·供体母猪超数排卵 | 第72页 |
| ·原核胚胎获取 | 第72页 |
| ·显微注射 | 第72页 |
| ·受体母猪胚胎移植 | 第72-73页 |
| ·受体母猪妊娠与产仔 | 第73页 |
| ·转基因猪的鉴定 | 第73-75页 |
| 3. 结果 | 第75-105页 |
| ·基因片段的分离,鉴定和序列分析 | 第75-79页 |
| ·猪HOXA10基因的克隆与序列分析 | 第75-76页 |
| ·猪HOXA10基因的多序列比对与分子系统进化树的构建 | 第76-78页 |
| ·猪HOXA10基因核苷酸结构分析 | 第78-79页 |
| ·猪HOXA10基因序列变异及其与性状的关联分析 | 第79-83页 |
| ·猪HOXA10基因的SNP检测 | 第79-82页 |
| ·猪HOXA10基因外显子PCR-RFLP-MslI多态与繁殖性状的关联分析 | 第82-83页 |
| ·猪HOXA10基因组织表达检测 | 第83-84页 |
| ·猪HOXA10基因在梅山和大白猪不同妊娠时期子宫内膜中表达研究 | 第84-85页 |
| ·孕酮注射诱导小鼠子宫内膜HOXA10基因的表达及与胚胎着床数的关系研究 | 第85-87页 |
| ·小鼠胚胎染色结果 | 第85-86页 |
| ·荧光定量PCR检测小鼠子宫内膜HOXA10基因表达 | 第86-87页 |
| ·猪HOXA10基因转录调控初步研究 | 第87-92页 |
| ·猪HOXA10基因启动子克隆以及雌激素受体结合位点的预测 | 第87-88页 |
| ·猪HOXA10基因启动子活性初步验证 | 第88-89页 |
| ·猪HOXA10基囚系列删除载体构建及细胞验证 | 第89-91页 |
| ·荧光素酶活性检测鉴定猪HOXA10基因雌激素诱导启动子片段 | 第91-92页 |
| ·雌激素诱导启动子对猪HOXA10基因表达调控作用的细胞水平验证 | 第92-94页 |
| ·猪HOXA10基因雌激素诱导启动子表达载体构建 | 第92-93页 |
| ·Ishikawa细胞中鉴定雌激素诱导启动子对HOXA10基因表达的调控 | 第93-94页 |
| ·激素诱导型HOXA10基因转基因小鼠及转基因猪的制备及检测 | 第94-105页 |
| ·显微注射用DNA的纯化及检测 | 第95页 |
| ·转HOXA10基因小鼠的鉴定及表达分析 | 第95-101页 |
| ·转HOXA10基因首建小鼠(F_0代)的PCR鉴定 | 第95-97页 |
| ·转基因小鼠的Southern blot检测 | 第97-98页 |
| ·F_2代转HOXA10基因小鼠的表达分析 | 第98-101页 |
| ·转基因猪的鉴定 | 第101-105页 |
| ·转HOXA10基因猪的PCR鉴定 | 第101-102页 |
| ·转HOXA10基因猪Southern杂交鉴定结果(地高辛标记法) | 第102-105页 |
| 4 讨论 | 第105-120页 |
| ·关于选取HOXA10基因作为猪繁殖性状的候选基因 | 第105页 |
| ·关于猪HOXA10基因的分离及结构分析 | 第105-106页 |
| ·关于猪HOXA10基因的SNP及部分繁殖性状的关联 | 第106-107页 |
| ·关于猪HOXA10基因的表达研究 | 第107-115页 |
| ·关于猪HOXA10基因的组织表达分析 | 第107页 |
| ·关于HOXA10基因在大白和梅山猪不同妊娠时期子宫内膜中的表达差异 | 第107-115页 |
| ·关于引起猪产仔数差异的胚胎发育过程中的三个关键时期 | 第108页 |
| ·关于不同妊娠时期大白猪和梅山猪子宫内膜中HOXA10基因的表达差异 | 第108-109页 |
| ·HOXA10基因对妊娠过程中母体与胎儿的调控 | 第109-113页 |
| ·关于猪HOXA10基因在子宫内膜组织中的表达 | 第113页 |
| ·关于雌激素(E_2)和孕激素(P_4)对子宫内膜中HOXA10基因表达的影响 | 第113-115页 |
| ·关于孕酮注射小鼠胚胎着床情况与HOXA10基因表达的研究 | 第115-116页 |
| ·关于猪HOXA10基因启动子激素诱导的调控区域的研究 | 第116-118页 |
| ·关于激素诱导型转基因动物的制备及鉴定 | 第118-120页 |
| ·关于转基因载体的启动子 | 第118页 |
| ·关于HOXA10转基因小鼠模型的建立 | 第118-119页 |
| ·关于激素诱导型转HOXA10基因猪的制备 | 第119页 |
| ·关于转基因动物的检测 | 第119-120页 |
| 5 小结 | 第120-123页 |
| ·本研究的主要结论 | 第120-121页 |
| ·本研究的特色与创新点 | 第121页 |
| ·值得进一步研究的问题 | 第121-123页 |
| 参考文献 | 第123-140页 |
| 攻读期间撰写论文题录 | 第140-141页 |
| 致谢 | 第141-142页 |
