| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-13页 |
| 本文所用主要缩略词 | 第13-14页 |
| 本研究的创新点 | 第14-15页 |
| 第一部分 文献综述 | 第15-45页 |
| 第一章 棉花抗虫基因工程研究进展 | 第15-29页 |
| 1 苏云金芽孢杆菌杀虫蛋白的一般特性 | 第16-19页 |
| ·苏云金芽孢杆菌杀虫蛋白基因的分类 | 第16页 |
| ·苏云金芽孢杆菌杀虫蛋白的分子结构与功能 | 第16-18页 |
| ·苏云金芽孢杆菌晶体蛋白的杀虫机理 | 第18-19页 |
| 2 Bt杀虫蛋白转基因植物 | 第19-21页 |
| 3 Bt抗虫棉的应用 | 第21-22页 |
| 4 Bt抗虫棉抗虫性的研究 | 第22-25页 |
| ·Bt抗虫棉杀虫活性的时空性 | 第22-23页 |
| ·影响转基因抗虫棉抗虫性的因素 | 第23-24页 |
| ·转基因抗虫棉的抗虫性遗传及遗传稳定性 | 第24-25页 |
| 5 转Bt抗虫基因棉花的安全性问题 | 第25页 |
| 6 抗虫棉花研究展望 | 第25-29页 |
| ·转多基因抗虫棉的培育 | 第25页 |
| ·采用特异启动子调控外源抗虫基因在棉株体内的高效表达 | 第25-26页 |
| ·修饰Bt基因,以改善Bt毒蛋白的杀虫效能 | 第26-27页 |
| ·重视外源与内源抗虫系统间的协调性,加强现代基因工程与传统抗虫育种相结合 | 第27页 |
| ·筛选广谱性抗虫基因,培育广谱性抗虫棉花 | 第27-29页 |
| 第二章 转基因植物中有关外源基因整合的研究现状 | 第29-45页 |
| 1 植物转化过程中外源基因进入植物细胞的机制 | 第29-33页 |
| ·农杆菌介导法中T-DNA进入植物细胞核的机制 | 第29-30页 |
| ·直接导入法中外源基因进入植物细胞的机制 | 第30-31页 |
| ·种质系统转化法中外源基因进入植物细胞的机制 | 第31-33页 |
| 2 植物遗传转化过程中外源基因的整合研究 | 第33-40页 |
| ·农杆菌介导植物转化过程中T-DNA整合过程的研究 | 第33-35页 |
| ·直接导入和种质系统介导转化中外源基因在植物基因组中的整合研究 | 第35-37页 |
| ·获得T-DNA或转座子插入旁邻序列的方法 | 第37-40页 |
| 3 外源基因整合、遗传稳定性与外源基因表达 | 第40-44页 |
| ·关于外源基因的整合特性与外源基因表达 | 第40-42页 |
| ·外源基因的遗传稳定性与外源基因表达 | 第42-44页 |
| 本研究的目的与意义 | 第44-45页 |
| 第二部分 研究报告 | 第45-96页 |
| 第三章 花粉管通道法获得Bt+Sck双价抗虫棉及转化机理初探 | 第45-75页 |
| 1 材料与方法 | 第46-62页 |
| ·材料 | 第46-49页 |
| ·方法 | 第49-62页 |
| ·质粒的大量提取 | 第49-50页 |
| ·陆地棉花粉管通道法的转化 | 第50页 |
| ·卡那霉素筛选 | 第50页 |
| ·对苗床筛选出的抗性植株进行PCR扩增 | 第50-52页 |
| ·转基因棉株的室内抗虫性测定 | 第52-53页 |
| ·转基因植株的Southern blot杂交分析 | 第53-55页 |
| ·转基因当代植株叶片总RNA反转后以目的基因引物序列进行RT-PCR | 第55-58页 |
| ·转基因植株的Bt毒蛋白含量分析 | 第58-59页 |
| ·TAIL-PCR法从转基因棉花DNA中扩增出插入位点的旁侧序列 | 第59-62页 |
| 2 结果与分析 | 第62-70页 |
| ·转化植株的卡那霉素抗性筛选及PCR扩增结果 | 第62-64页 |
| ·转基因植株的Southern blot杂交分析 | 第64-65页 |
| ·转基因植株叶片总RNA反转后以目的基因引物序列进行RT-PCR | 第65-66页 |
| ·转基因植株的Bt毒蛋白含量分析 | 第66-67页 |
| ·转基因棉株的室内抗虫性测定 | 第67-68页 |
| ·转基因棉花中插入区域侧翼序列的克隆及测序 | 第68-69页 |
| ·T-DNA插入区侧翼序列与GenBank database的比对 | 第69-70页 |
| 3 讨论 | 第70-75页 |
| ·棉花的遗传转化 | 第70-72页 |
| ·转基因抗虫棉中Bt毒蛋白的检测 | 第72-73页 |
| ·启动子与抗虫棉的抗虫效果 | 第73-74页 |
| ·TAIL-PCR方法扩增T-DNA插入位点的侧翼序列 | 第74-75页 |
| 第四章 转Bt+Sck双价抗虫棉的遗传和表达及其农艺性状分析 | 第75-96页 |
| 1 材料与方法 | 第76-78页 |
| ·材料 | 第76-77页 |
| ·植物材料 | 第76-77页 |
| ·生物测试的昆虫 | 第77页 |
| ·生化试剂 | 第77页 |
| ·方法 | 第77-78页 |
| ·抗虫性的生物测定方法 | 第77页 |
| ·Bt和Sck抗虫基因在转基因棉花中的遗传稳定性检测的分子生物学方法 | 第77页 |
| ·转Bt+Sck双价基因棉花抗虫性的遗传方式及与其它转基因抗虫棉抗虫基因遗传关系的测定方法 | 第77-78页 |
| ·转Bt+Sck双价基因棉花各世代Bt毒蛋白含量的测定 | 第78页 |
| ·转Bt+Sck双价基因棉花纯系的田间棉铃虫调查 | 第78页 |
| ·转Bt+Sck双价基因棉花纯系重要农艺性状的考查 | 第78页 |
| 2 结果与分析 | 第78-92页 |
| ·转Bt+Sck双价基因棉花对棉铃虫抗性的遗传方式 | 第78-80页 |
| ·转Bt+Sck双价基因棉花自交后代的分离 | 第78-79页 |
| ·转Bt+Sck双价基因棉花与原始受体苏棉16杂交组合的抗性分离 | 第79-80页 |
| ·转Bt+Sck双价基因棉花与R19,SGK321抗性基因的遗传关系 | 第80-81页 |
| ·转Bt+Sck双价基因棉花与R19、SGK321抗虫棉杂交种F_1对棉铃虫抗性表现 | 第80页 |
| ·转Bt+Sck双价基因棉花与R19、SGK321 F_2群体对棉铃虫的抗性分离 | 第80-81页 |
| ·转Bt+Sck双价基因棉花的遗传稳定性 | 第81-84页 |
| ·转Bt+Sck双价基因棉花中外源抗虫基因的遗传稳定性 | 第81-82页 |
| ·转Bt+Sck双价基因棉花后代的Southern blot | 第82-83页 |
| ·转Bt+Sck双价基因棉花后代的RT-PCR | 第83页 |
| ·转Bt+Sck双价基因棉花不同世代抗虫性的遗传稳定性 | 第83-84页 |
| ·转Bt+Sck基因T_2代纯系的Bt毒蛋白含量分析 | 第84-86页 |
| ·转Bt+Sck基因T_2代纯系的抗虫性测定 | 第86-87页 |
| ·转Bt+Sck基因T_2代纯系的田间棉铃虫调查 | 第87-88页 |
| ·转Bt+Sck基因纯系重要农艺性状的考查 | 第88-92页 |
| ·转Bt+Sck基因纯系与转基因受体苏棉16形态性状的比较 | 第88-90页 |
| ·转Bt+Sck基因纯系及原始受体苏棉16重要农艺性状的调查结果 | 第90-92页 |
| 3 讨论 | 第92-96页 |
| ·转Bt+Sck双价基因棉花的遗传分析 | 第92-93页 |
| ·转Bt+Sck双价基因棉花的抗虫性与Bt毒蛋白含量的关系 | 第93-94页 |
| ·Bt+Sck双价基因导入对受体品种农艺性状的影响 | 第94-96页 |
| 全文结论 | 第96-97页 |
| 参考文献 | 第97-112页 |
| 致谢 | 第112-113页 |
| 发表论文情况 | 第113页 |
